[发明专利]一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法

说明书

本发明公开了一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法，涉及铜绿假单胞菌检测技术领域，本发明所述的铜绿假单胞菌显色培养基包括基础培养基、显色底物、抑菌剂，显色底物包括2,3,5‑苯基氯化四氮唑、4‑甲基伞形酮‑D‑葡萄糖醛酸苷，抑菌剂包括萘啶酮酸、环丝氨酸、牛胆盐，2,3,5‑苯基氯化四氮唑可以和铜绿假单胞菌代谢产物作用显红色，4‑甲基伞形酮‑D‑葡萄糖醛酸苷和铜绿假单胞菌作用在366nm紫外灯下显荧光；2,3,5‑苯基氯化四氮唑和抑菌剂共同配合能够抑制常见的干扰菌的生长，避免出现假阳性的情况，本发明所述铜绿假单胞菌快速检测的方法，仅需24h即可对铜绿假单胞菌检测计数，省时省力，稳定可靠，灵敏性更佳。

技术领域

本发明涉及铜绿假单胞菌检测技术领域，更具体的说，它涉及一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)属于假单胞菌属，普遍分布于自然界中，可以在水中生存时间很长，，被认为是一种水源性条件致病菌；铜绿假单胞菌可引起正常人腹泻等疾病，患代谢疾病、血液病和恶性肿瘤的病人，以及术后或某些治疗后的患者易感染本菌；本菌经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等，本菌引起的感染病灶可导致血行散播，而发生菌血症和败血症，烧伤后感染了铜绿色假单胞菌可造成死亡，是危害人类健康的一大威胁。

世界卫生组织和我国将此菌都作为瓶装饮用水的污染危害指示菌，日本和加拿大等国家已经对水中的铜绿假单胞菌的存在做出了限量规定；国际食品法典委员会(CAC)和欧盟成员国都明确作出了相应的规定，并指出在水中不得检测出此菌。

根据我国GB8537-2018食品安全国家标准中，关于微生物限量标准一项，其中铜绿假单胞菌(单位：CFU/250mL)，标准值为n＝5c＝0m＝0，即5份样品中，各取250mL检测，5份样品中铜绿假单胞菌检测值必须全部为0CFU，意为5份水样检测中铜绿假单胞菌菌落数量均为0，允许出现特例的水样数量为0，才为合格。

GB8538-2016食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法中给出一种铜绿假单胞菌的检测方法，需要先对水样进行过滤，然后将过滤后的滤膜平铺在已制备好的CN琼脂平板上，将平板倒置于36℃±1℃培养24h～48h，在培养20h～24h和40h～48h后观察滤膜上菌落的生长情况并计数，如果菌落全部呈现蓝绿色即判定为铜绿假单胞菌检测结果为阳性，但这种情况比较少出现；在实际操作过程中，如果出现产荧光(非蓝/绿色)菌落时，需要对这种菌落进行产氨试验，产氨试验检测结果为阳性即判定为检出铜绿假单胞菌；实际操作过程中，如果出现红褐色菌落时，需要对这种菌落进行产氨试验、氧化酶试验、荧光试验，当检测结果均呈阳性的时候即判定为检出铜绿假单胞菌。

水样中可能存在铜绿假单胞菌或其他干扰干扰菌，因此使用上述方法对水样进行过滤培养24h～48h后，通常会产生干扰菌落，即出现产荧光(非蓝/绿色)菌落或红褐色菌落，此时至少需要额外的1-5天做进一步的生化实验，以确定这些菌落是否为铜绿假单胞菌，综合的检测时间需要约5-7天，非常的耗时费力；并且在培养后铜绿假单胞菌和其他干扰干扰菌的菌落需要用专业的实验员肉眼对菌落的颜色和形态进行判断，菌落过分生长有可能出现菌落融合，非常考验实验员的工作经验是否丰富，而当铜绿假单胞菌发生变异时，菌落形态和颜色发生改变，难以从菌落颜色和形态上进行判断，容易造成漏判、误判。

发明内容

本发明的目的在于提供一种铜绿假单胞菌显色培养基，其通过在铜绿假单胞菌培养基中加入铜绿假单胞菌特异性显色酶底物，由于食品、水源中是禁止检出铜绿假单胞菌的，水源中存假铜绿假单胞菌的情况下，能够在24小时内在显色培养基中显色呈阳性检出并计数。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种铜绿假单胞菌显色培养基，包括基础培养基、显色底物、抑菌剂，所述显色底物包括2,3,5-苯基氯化四氮唑；所述抑菌剂包括萘啶酮酸；所述基础培养基包括碳源、氮源、无机盐、生长因子、水。