[发明专利]一种铜绿假单胞菌显色培养基及利用其快速检测的方法

权利要求书

1.一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，包括基础培养基、显色底物、抑菌剂，所述显色底物包括2,3,5-苯基氯化四氮唑；所述抑菌剂包括萘啶酮酸；所述基础培养基包括碳源、氮源、无机盐、生长因子、水。

2.根据权利要求1所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述显色底物2,3,5-苯基氯化四氮唑的用量为0.1-1.0g/L。

3.根据权利要求1所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述抑菌剂萘啶酮酸的用量为0.01-0.03g/L。

4.根据权利要求1所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述显色底物还包括4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷。

5.根据权利要求4所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷的用量为0-0.1g/L。

6.根据权利要求1所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述碳源的用量为0-40g/L，所述碳源由葡萄糖提供；所述氮源的用量为5-25g/L，所述氮源由蛋白胨和/或酪蛋白提供；所述生长因子由酵母浸膏提供，所述酵母浸膏的用量为2-14g/L；所述无机盐包括硫酸钾、氯化镁，所述硫酸钾的用量为5-20g/L，所述氯化镁的用量为1-3g/L；余量为蒸馏水。

7.根据权利要求1所述的一种铜绿假单胞菌显色培养基，其特征在于，所述抑菌剂还包括有环丝氨酸、牛胆盐中的一种或多种；所述牛胆盐的用量为0-1.0g/L；所述环丝氨酸的用量为0-1.0g/L。

8.一种铜绿假单胞菌快速检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤A、配制权利要求书1-7中任意一种铜绿假单胞菌显色培养基；

步骤B、对待测水源混匀并取样250mL后得到待测样品；

步骤C、对待测样品进行梯度稀释后得到梯度稀释待测样品；

步骤D、用无菌镊子夹取灭菌过滤膜边缘部分,粗糙面向上贴放在已灭菌的滤床上,固定好过滤器，对步骤B中的待测样品或步骤C中的梯度稀释待测样品通过过滤膜进行过滤，所述过滤膜的规格为0.45μm；

步骤E、将步骤D中的过滤膜有菌一面向上，无菌贴合于步骤A中制备的铜绿假单胞菌显色培养基上进行接种，平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留气泡；

步骤F、将接种完毕的铜绿假单胞菌显色培养基置于25-42℃的培养箱内24-48h；

步骤G、从培养箱中取出，选取每皿30-300CFU之间的平板计数并计算样品中铜绿假单胞菌的含量。

9.根据权利要求8所述的一种铜绿假单胞菌快速检测的方法，其特征在于，所述步骤A具体包括：

步骤a.用电子天平称取蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、硫酸钾、氯化镁；

步骤b.直接加入蒸馏水，稍微加热使其完全溶解；

步骤c.再加入显色底物2,3,5-苯基氯化四氮唑、4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷；加入抗菌素萘啶酮酸，加入环丝氨酸、牛胆盐中的一种或多种；

步骤d.25℃下混匀后调节pH=5-9；

步骤e.最后加入琼脂粉10-20g，煮沸使其完全溶解；

步骤f.冷却至50℃，在超净工作台上倒入无菌平板内，凝固后制成铜绿假单胞菌显色培养基；

步骤g.放置于2-8℃避光环境中保存。

10.根据权利要求8所述的一种铜绿假单胞菌快速检测的方法，其特征在于，所述步骤C具体包括：

步骤a1.将充分混匀的待测样品取27.5mL放入247.5mL灭菌生理盐水中稀释，充分混匀，制成1:10的梯度稀释待测样品；

步骤b1.用灭菌吸管吸取1:10的梯度稀释待测样品27.5mL，放入247.5mL灭菌生理盐水中稀释，充分混匀，制成1:100的梯度稀释待测样品；

步骤c1.另取1mL灭菌吸管，按步骤b1操作顺序，制作10倍递增稀释待测样品，每递增一次换用一支1mL灭菌吸管，制成若干倍数的均匀稀释液；

步骤d1.取每个倍数的均匀稀释液250mL进行下一步操作。