[发明专利]一种高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法

权利要求书

1.一种高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法包括：

步骤一，接种培养：吸取筛选培养基于96孔板中，并挑取少量突变体单克隆于对应96孔板孔中，挑完后，让单克隆均匀分散于培养基中，在恒温摇床中培养；

步骤二，OD595测量：将96孔板取出，吹扫各孔培养物后，利用多功能酶标仪高通量检测595nm吸光值；

步骤三，尼罗红染色：利用排枪加20％DMSO水溶液于96孔黑色酶标板中，再将96孔板中的培养物转于96孔黑色酶标板中，加入后用排枪轻吹，再加入0.1mg/ml尼罗红试剂，然后用排枪轻吹混匀；锡箔纸包好后放于恒温水浴锅中水浴；孵育结束后取出酶标板，利用多功能酶标仪检测激发光波长为485±20nm，发射光波长为595±10nm的荧光强度，并扣除未染色菌液的荧光强度；

步骤四，数据分析：将每两板96孔板中的荧光值与OD595值的比值的最大或最小的各五个突变体转板保存，并记录对应单克隆板的编号；

步骤五，复筛：挑选步骤四中的FI/OD₅₉₅前五的突变体进行复筛。

2.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，步骤一中，用排枪吸取200μl筛选培养基于96孔板中；

在恒温摇床中培养30h，培养条件：28℃，摇床转速200rpm。

3.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，步骤二中，将96孔板取出，用200μl排枪轻吹各孔培养物后，放于多功能酶标仪检测595nm吸光值。

4.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，步骤三中，用排枪取50μl20％DMSO水溶液于96孔黑色酶标板中；

再加入4μl0.1mg/ml尼罗红试剂，然后用排枪轻吹混匀；

用锡箔纸包好后放于40℃恒温水浴锅中水浴10min。

5.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，步骤五中，复筛具体操作方法同步骤一～步骤四。

6.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，进行接种培养前，需进行：利用紫外UVC诱变建立随机突变体库。

7.如权利要求1所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法，其特征在于，所述高通量筛选高产油裂殖壶菌突变体的方法进一步包括：

筛选条件优化：进行裂殖壶菌尼罗红染色条件优化、选用单位细胞密度油脂量作为筛选依据、确定尼罗红的染色时间点；

对复筛中的FI/OD₅₉₅前三的突变体，进行表型验证。