[发明专利]一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺

权利要求书

1.一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺，采用分批发酵的方式，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：发酵种子培养

将褐黄孢链霉菌接种于固体贝塔纳培养基上，于29℃恒温培养箱中培养10天，直至长出褐黄色孢子；用接种环挑取3环孢子置于装有60mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，于29℃、220rpm条件下恒温振荡培养2天；

步骤2：5L发酵罐分批培养的前处理

配制除去葡萄糖的纳他霉素发酵培养基，加入到5L发酵罐中，总装液量设置为1.5L，另添加80g饱和脂肪酸，于115-121℃灭菌20-30min，结束后立即开动搅拌，并开通控温系统使发酵罐冷却至29℃，此过程可将高温脂肪酸液滴打碎，冷却后形成小粒度固体饱和脂肪酸；然后将灭菌的溶有80g葡萄糖的500mL水溶液用蠕动泵全部补入，配成混合碳源发酵培养基；

步骤3：5L发酵罐分批发酵

向步骤2获得的混合碳源发酵培养基中以8%的接种量接种步骤1获得的发酵种子，培养发酵，全过程发酵pH值不进行控制，直至纳他霉素合成停止。

2.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于：

所述固体贝塔纳培养基的配方以1L计，包括如下：葡萄糖10g，酵母粉1g，蛋白胨2g，琼脂20g，pH 7.5；

所述液体种子培养基的配方以1L计，包括如下：葡萄糖20g，酵母粉6g，大豆蛋白胨6g，pH 7.5；

所述纳他霉素发酵培养基的配方以1L计，包括如下：碳源若干，酵母粉10g，大豆蛋白胨20g，CaCO₃ 5g，pH 7.5。

3.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于：

所述饱和脂肪酸为硬脂酸或软脂酸。

4.根据权利要求1所述的发酵工艺，其特征在于：

步骤3中，于初始pH值6.5、温度29℃、溶氧保持在30%以上的培养条件下发酵。

5.一种基于外源饱和脂肪酸添加的纳他霉素发酵工艺，采用补料分批发酵的方式，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：发酵种子培养

将褐黄孢链霉菌接种于固体贝塔纳培养基上，于29℃恒温培养箱中培养10天，直至长出褐黄色孢子；用接种环挑取3环孢子置于装有60mL液体种子培养基的500mL三角瓶中，于29℃、220rpm条件下恒温振荡培养2天；

步骤2：5L发酵罐补料分批培养的前处理

配制除去葡萄糖的纳他霉素发酵培养基，加入到5L发酵罐中，总装液量设置为1.5L，另添加80g饱和脂肪酸，于115-121℃灭菌20-30min，结束后立即开动搅拌，并开通控温系统使发酵罐冷却至29℃，此过程可将高温脂肪酸液滴打碎，冷却后形成小粒度固体饱和脂肪酸；然后将灭菌的溶有160g葡萄糖的500mL水溶液用蠕动泵全部补入，配成混合碳源发酵培养基；

步骤3：5L发酵罐补料分批发酵

向步骤2获得的混合碳源发酵培养基中以8%的接种量接种步骤1获得的发酵种子，培养发酵，全过程发酵pH值不进行控制，当发酵液中葡萄糖浓度降低到10g/L时，通过外源流加60%无菌葡萄糖溶液将葡萄糖浓度维持在10~20g/L范围内，直至纳他霉素合成停止。

6.根据权利要求5所述的发酵工艺，其特征在于：

所述固体贝塔纳培养基的配方以1L计，包括如下：葡萄糖10g，酵母粉1g，蛋白胨2g，琼脂20g，pH 7.5；

所述液体种子培养基的配方以1L计，包括如下：葡萄糖20g，酵母粉6g，大豆蛋白胨6g，pH 7.5；

所述纳他霉素发酵培养基的配方以1L计，包括如下：碳源若干，酵母粉10g，大豆蛋白胨20g，CaCO₃ 5g，pH 7.5。

7.根据权利要求5所述的发酵工艺，其特征在于：

所述饱和脂肪酸为硬脂酸或软脂酸。

8.根据权利要求5所述的发酵工艺，其特征在于：

步骤3中，于初始pH值6.5、温度29℃、溶氧保持在30%以上的培养条件下发酵。