[发明专利]一种具有增强免疫活性的青蛤多糖及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有增强免疫活性的青蛤多糖，所述青蛤多糖的主链由→4)‑α‑D‑Glcp(1→构成，所述青蛤多糖结构中→4)Glc(1→和→4,6)Glc(1→的比例为6.8:1，分子量为380KDa，单糖组成为甘露糖:葡萄糖＝1:35；以青蛤为原料，经过包括脱脂、酶解、络合沉淀、醇沉除杂和DEAE‑纤维素柱纯化等步骤，制得青蛤多糖；本发明所得青蛤多糖能促进RAW 264.7细胞生成NO，在所述青蛤多糖1～10μg/mL范围内能极显著提高RAW 264.7细胞NO分泌能力且与剂量呈正相关；所述青蛤多糖可作为开发免疫调节药物及功能性食品的重要来源，为海洋贝类的高值转化提供理论依据和实践指导。

技术领域

本发明涉及活性多糖技术领域，具体涉及一种具有增强免疫活性的青蛤多糖、提取方法及其在增强免疫的功能食品或药品中的应用。

背景技术

青蛤(Cyclina sinensis)，又称黑蛤、铁蛤、圆蛤、蛤蜊、牛眼蛤，广泛分布于辽宁、河北、山东、江苏、浙江、福建、广东、广西以及海南岛等地，是我国南北沿海习见和主要的食用双壳贝类，在我国滩涂贝类养殖中占有重要的经济地位。青蛤不但具有食用价值，而且还具有药用价值，是非常重要的海洋药物；《神农本草经》、《本草纲目》等均将青蛤作为一种常用药物收录其中。青蛤具有很高的营养及药用价值，故青蛤资源的开发利用一直受到人们的重视。

现代医学、分子生物学及细胞生物学的发展，使人们认识到免疫系统紊乱不仅会产生诸多疾病，且与人体衰老和中老年人多发病如肿瘤、高血压、糖尿病甚至精神病发生均有密切关系。因此，寻找高效的免疫调节剂已成为当代新药或功能保健品的发展方向之一。诸多的免疫调节剂中，多糖类最为引人注目，多糖具有突出的免疫调节活性，且对机体正常细胞和组织基本没有毒性，可作为开发免疫调节药物及功能性食品的重要来源。但目前具有免疫活性的多糖来源极其有限，因此，亟需开发新的具有高免疫活性的多糖解燃眉之急。

发明内容

本发明的目的在于提供一种青蛤多糖，以青蛤贝肉为原料，通过脱脂、双酶法酶解、季铵盐络合沉淀、纯化等过程制备得到一种多糖成分。主链结构为→4)-α-D-Glcp-(1→，1μg/mL的剂量即可增强免疫活性。

为实现上述目的，本发明提供了一种具有增强免疫活性的青蛤多糖，所述青蛤多糖的主链由→4)-α-D-Glcp(1→构成，所述青蛤多糖结构中→4)Glc(1→和→4,6)Glc(1→的比例为6.8:1，分子量为380KDa，单糖组成为甘露糖:葡萄糖＝1:35。

所述具有增强免疫活性的青蛤多糖的制备方法，包括步骤：

S1、制备脱脂粉：取青蛤肉冻干后破碎成青蛤粉，使用丙酮对所述青蛤粉进行脱脂，干燥得脱脂粉；

S2、酶解：取步骤S1所述脱脂粉，每克脱脂粉中加入2～5mL 0.05mol/L的半胱氨酸-EDTA二钠溶液和15～25mL 0.05mol/L、pH＝8的K₂HPO₄缓冲液，再加入胰蛋白酶干粉，37℃、100～150rpm振荡酶解2～5h，得混合溶液1；向所述混合液1中加入木瓜蛋白酶干粉，65℃、100～150rpm振荡酶解1～5h得混合液2；

其中，所述胰蛋白酶的添加量为每克脱脂粉加入1250～7500U的胰蛋白酶；所述木瓜蛋白酶的添加量为每克脱脂粉加入10000～60000U的木瓜蛋白酶；

S3、灭酶：将步骤S2所述混合液2加热，使酶失活，冷却到室温，离心取上清液；

S4、络合沉淀：向步骤S3所述上清液中加入质量百分浓度(m/m)0.1％～15％的氯化十六烷基吡啶溶液(CPC)，室温放置2～48h，离心取沉淀1；

其中，所述质量浓度(m/m)0.1～15％氯化十六烷基吡啶溶液的添加量为：以步骤S2所述脱脂粉的添加量为参照，每克脱脂粉对应添加1～2mL质量浓度(m/m)0.1～15％氯化十六烷基吡啶溶液；