[发明专利]一种载有纳米颗粒的微米颗粒疫苗载体的制备方法

权利要求书

1.一种载有纳米颗粒的微米颗粒疫苗载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）制备纳米颗粒；

（2）将纳米颗粒对抗原进行负载，获得负载有抗原的纳米颗粒；

（3）将上述步骤（2）所述负载有抗原的纳米颗粒加入Na₂CO₃水溶液，超声使其分散均匀；将佐剂加入到CaCl₂水溶液中使其充分溶解；将上述两种溶液等体积混合，搅拌之后静置，离心，超纯水洗涤，得到载有纳米颗粒的微米颗粒疫苗载体，该微米颗粒疫苗载体同时含有抗原和佐剂；

所述的纳米颗粒为氧化硅、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米颗粒、磁性四氧化三铁中的一种，所述的纳米颗粒的粒径小于500 nm；

所述的抗原为蛋白质抗原OVA、多肽抗原GPC-3、多肽抗原Trp2、多肽抗原M27或多肽抗原M30中的一种或几种的组合；

所述的佐剂为TLR激动剂，所述的TLR激动剂为CpG、R848、PolyI:C中的一种或多种；

步骤（3）所述加入的负载有抗原的纳米颗粒的量为0.5-200 mg；所述Na₂CO₃水溶液的加入量为1-10 mL；所述Na₂CO₃水溶液的浓度为0.1-1.0 M；所述佐剂的加入量为0.25-100mg，所述CaCl₂水溶液的加入量为1-10 mL，所述CaCl₂水溶液的浓度为0.1-1.0 M；

所述的载有纳米颗粒的微米颗粒疫苗载体的直径为5±0.5μm；

对于不同的纳米颗粒的抗原负载方式不同。