[发明专利]一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将直径4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨成镜面，超纯水清洗干净；

（2）将6 µL、1 ~ 3 mg/mL的Au NPs溶液滴涂于上述电极表面，室温下晾干，超纯水洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8 ~ 12 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱干燥；

（4）继续将3 µL、0.5 ~ 1.5 mg/mL、质量分数为1 %的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封装电极表面的非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，除去未结合的BSA，4 ℃冰箱晾干；

（5）继续滴加6 µL、10 fg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱晾干；

（6）继续滴加6 µL、1.5 ~ 3.5 mg/mL的检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab₂溶液于电极表面，置于4 ℃冰箱中孵化40 min，超纯水冲洗、晾干，制得一种Pt@MOF-GO标记的电化学传感器；

所述Au NPs溶液的制备，其特征在于，步骤如下：

将0.4 ~0.8 mmol的HAuCl₄加入10 mL水中，搅拌下加热到90 ℃，逐滴加入柠檬酸钠20~ 40 mmol，溶液在3 min内由黄色逐渐变为蓝色，20 min后变为酒红色，制得分散均匀的AuNPs溶液；

所述检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab₂溶液的制备，其特征在于，步骤如下：

（1）GO的制备

将40 ~ 60 mL、浓度为98 %的浓硫酸加入到500 mL烧杯中，将烧杯置于0 ℃冰浴中并搅拌，缓慢加入1 g石墨粉，搅拌均匀后，加入0.3 ~ 0.7 g硝酸钠，继续缓慢加入5 ~ 8 g高锰酸钾，在0 ℃冰水浴下搅拌60 ~ 120 min后，移入50 ℃水浴，搅拌90 ~ 150 min后，将水浴温度升至55 ℃，搅拌2 ~ 3 h，逐滴加入25 ~ 50 mL超纯水后，继续缓慢加入100 mL的超纯水，搅拌10 ~ 20 min，然后匀速加入5 ~ 10 mL、30 %过氧化氢，搅拌10 ~ 15 min，在室温下静置12 h，下层沉淀离心，超纯水洗涤后，将沉淀物移入透析袋并密封，置于500 mL烧杯中，加入400 mL超纯水透析4 ~ 5天后，取1 g沉淀物，加入100 ~ 200 mL超纯水，超声20~ 30 min，在3000 rpm下离心5 ~ 10 min，将得到的上清液继续以4500 rpm离心2 ~ 5min，取上清液置于50 mL培养皿中，在-20 ℃冰箱中冷冻12 h后，放入冷冻干燥机中，-80℃下冷冻干燥后，得到GO；

（2）MOF-GO的制备

称取均苯三酸0.05 ~ 0.15 g，硝酸铜0.15 ~ 0.3 g，加入到盛有35 mL DMF的烧杯中，加入0.05 ~ 0.2 mL的三乙胺，超声5 min分散均匀，然后加入20 ~ 40 mg上述制备的GO，超声15 min分散均匀，移入容量为50 mL的聚四氟乙烯的高压釜内，70 ℃反应20 ~24 h，冷却至室温，用DMF离心清洗三次，将洗涤后的固体浸泡在35 mL的二氯甲烷中，每24 h换一次新鲜的二氯甲烷，需更换三次，离心分离后，置于60 ℃真空干燥箱中干燥10 ~ 14 h，制得MOF-GO，置于真空袋中备用；

（3）Pt@MOF-GO的制备

取0.05 ~ 0.1 g的MOF-GO，在20 mL DMF溶液中超声分散20 min，然后加入5 ~ 15 mL、2 mg/mL的H₂PtCl₆溶液，搅拌3 h后离心分离，室温干燥得到固体粉末，将粉末重新分散在40mL的乙二醇中，超声分散10 min，加入40 mg/mL的NaOH调节pH至12 ~ 13，120 ℃下搅拌反应4 h，离心分离，在60 ℃的真空干燥箱中干燥10 ~ 14 h，制得Pt@MOF-GO；

（4）检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab₂溶液的制备

将1 ~ 3 mL、2 mg/mL的Pt@MOF-GO分散液加入到0.5 ~ 1.5 mL，10 μg/mL的肿瘤标记物检测抗体Ab₂中，4 ℃恒温震荡箱中震荡孵化12 h，离心分离；重新分散至1 ~ 3 mL的pH为7.38的磷酸缓冲液中，制得检测抗体孵化物Pt@MOF-GO-Ab₂溶液。