[发明专利]一种可提高脐带间充质干细胞CD106和CD54亚群比例的培养基

说明书

CD106和CD54阳性间充质干细胞亚群具有较强的免疫抑制能力，可广泛用于免疫性疾病的治疗，但目前仅有通过免疫吸附方法纯化前述干细胞亚群的方法，其效率较低。为了解决前述问题，本发明提供了一种可提高脐带间充质干细胞CD106和CD54阳性亚群比例的无血清培养基及培养方法，具体地，添加肿瘤坏死因子配置成无血清间充质干细胞培养基，通过该培养基的培养及培养方法的优化达到提高脐带间充质干细胞CD106和CD54阳性亚群比例的目的。本发明可将脐带间充质干细胞CD106阳性亚群比例从10～20％提高至27.71％～86.63％，将CD54阳性亚群从85～90％提高至97.74％～100％。

技术领域

本发明涉及干细胞培养领域，具体涉及一种可提高脐带间充质干细胞CD106和CD54亚群比例的培养基及培养方法。

背景技术

间充质干细胞是一种具有多向分化潜能、自我更新能力的一类细胞，广泛用于再生医学研究。以往研究人员往往关注利用间充质干细胞的多向分化能力用于受损细胞的替换以达到受损器官的修复。随着研究的深入，现在大量研究表明间充质干细胞还具有强大的免疫调节能力，对间充质干细胞免疫调节的机制，目前主要认为是通过分泌多种旁分泌因子(HGF、PGE2、IDO、TGF-β1、IL-4及IL-10等)及粘附因子(CD106和CD54)发挥免疫调节的作用。治疗系统免疫疾病时(治疗系统性红斑狼疮等)，主要机制为旁分泌因子抑制机体整体免疫细胞的增殖和活性；但在治疗局部炎性引发的疾病时，则主要机制是由于细胞表面粘附因子粘附免疫细胞，通过一氧化氮-环氧化物水解酶信号途径达到抑制免疫细胞增殖和活性的目的。

脐带间充质干细胞是一种具有较高分化潜能的干细胞，可向多个方向进行分化。在治疗局部炎性引发的疾病时，脐带间充质干细胞CD106和CD54阳性亚群具有比阴性亚群更显著的疗效。

脐带间充质干细胞的CD54阳性率较高，通常在80％以上；但CD106阳性率较低，一般只有10～20％。专利《一种CD106阳性细胞、其鉴定、制备方法及应用》(授权公告号CN102539736 B)通过免疫纯化的方法来富集CD106阳性间充质干细胞，其操作复杂、容易污染、得率低，往往不能满足治疗所需。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种培养基，其特征在于，它是在StemPro MSCSFM Medium CTS完全培养基的基础上加入终浓度5～50ng/ml肿瘤坏死因子α的培养基；

如前述的培养基，其特征在于，所述StemPro MSC SFM Medium CTS完全培养基由如下成分组成：

500体积份的StemPro MSC SFM Basic Medium CTS、75体积份的StemPro MSC SFMSupplement CTS、5体积份的L-谷氨酰胺或谷氨酰胺替代物GlutaMAX。

如前述的培养基，所述StemPro MSC SFM Basic Medium CTS、StemPro MSC SFMSupplement CTS、GlutaMAX是Gibco公司产品。

如前述的培养基，所述肿瘤坏死因子α终浓度为15～50ng/ml。

如前述的培养基，所述肿瘤坏死因子α是Peprotech公司的重组人源肿瘤坏死因子α。

本发明还提供了一种可提高脐带间充质干细胞CD106和CD54阳性亚群比例的培养方法，它包括：

使用如前所述培养基处理脐带间充质干细胞24～48h。

如前述的培养方法，它还包括：使用如前所述StemPro MSC SFM Medium CTS完全培养基对脐带间充质干细胞进行原代培养。

如前述的培养方法，它还包括：使用如前所述StemPro MSC SFM Medium CTS完全培养基对脐带间充质干细胞进行驯化。