[发明专利]一种NPC培养基、外泌体的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种神经始祖细胞培养基，包括以下组分：DMEM/F12培养基，人转铁蛋白，重组人胰岛素，孕酮，皮质脂酮，T3(triodo‑I‑thyronine)，谷胱甘肽，过氧化氢酶，超氧化物歧化酶，乙酸维生素E，生育酚，亚油酸，硫辛酸，亚麻酸，左旋肉碱盐酸盐，腐胺，乙醇胺盐酸盐，亚硒酸钠，D‑半乳糖，乳酸，丙酮酸钠，谷氨酰胺，维生素H，脂化牛血清白蛋白，抗坏血酸维生素C，氯化钠，dorsomorphin，碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素；以及一种制备外泌体的方法和外泌体的应用，采用本发明的方法制备的外泌体亚(无)细胞具有费用低、安全、无免疫排斥、穿透血脑屏障、靶点准确、治疗手段简单等优势，在无细胞再生医学拥有巨大潜力。

技术领域

本发明涉及治疗神经退行性疾病的药物，尤其是一种NPC培养基、外泌体的制备方法和应用。

背景技术

目前神经退行性疾病，包括阿尔兹海默症和帕金森症，主要采用药物治疗。阿尔茨海默症是一种原因未明的中枢神经系统退行性变性疾病，以渐进性记忆障碍及认知功能丧失伴随日常生活能力下降和行为改变为特征。65岁以上阿尔茨海默症患病率为6.6％，80岁以上超过22％。根据美国2018年的医学统计报告，前十大致死疾病中，阿尔茨海默症排名第六。易倍申、安理申、艾斯能和力益临是当前治疗阿尔茨海默症的主要药物。

帕金森病是继阿尔茨海默病后第二常见的老年慢性渐行神经退行性疾病，也是目前仅次于肿瘤、心脑血管病，严重威胁老年人群健康的疾病。帕金森氏病的治疗方式主要有药物治疗和外科手术，二者都可以达到一定程度上缓解症状的目的。在疾病的早期，药物可以较好地改善症状，最常用也是最有效的药物是左旋多巴制剂(商品名为美多巴或息宁)，自六十年代开始应用于临床治疗以来，一直到现在都是临床上最核心的药物。外科治疗主要有神经核团细胞毁损手术(细胞刀)与电刺激手术两种方式，原理都是为了抑制脑细胞的异常活动，达到改善症状的目的。前者是在异常活跃的神经核团上制造一个直径约3毫米的毁损灶，后者则是埋植刺激器通过高频电刺激达到类似毁损的效果。从外科手术操作技术上讲两者并没有太大的区别，均是将电极放在特定的脑内核团靶点上，之后进行刺激或毁损。神经核团细胞毁损手术最大的缺点是易复发，是不可逆治疗，而电刺激手术为可逆的、可调式治疗方式。

尽管目前对阿尔茨海默症研究已深入到分子水平和基因水平，但目前尚无任何药物或治疗方法能从根本上治愈，一旦发病只能通过药物缓解病情，这也只是在早中期可以，到了晚期，药物也没有办法，还会出现各种并发症。治疗帕金森症的药物必须长期服用，一旦停止治疗，病情则会复发。在最初几年药物治疗效果较佳，但在长期服用以后，病人会感到药物有效时间缩短，有些病人会产生″剂末″现象和″开、关″波动。药物治疗有一定的局限性，通常经过 3-5年的治疗后病情会变得难以控制，药物的副作用与其疗效会功过相抵，病人感到日常生活能力受到很大限制。

由于阿尔茨海默症和帕金森症病人脑内病变的根源是神经细胞功能的减退，所以从理论上讲，神经干细胞(可以替代病人衰退的脑细胞)移植技术有很好的发展前景。干细胞，是一种未充分分化、尚不成熟的细胞，具有再生为各种组织器官和人体细胞的潜在功能。因此，干细胞及其分化产品为有效修复人体重要组织器官损伤及治愈神经系统疾病、心血管疾病、糖尿病、肿瘤、代谢性疾病、血液系统疾病、自身免疫性疾病等重要疾病提供了新的途径。但目前细胞治疗还面临着一系列的技术难点，包括细胞的储存运输、免疫排斥、致癌风险、手术难度高等，因此，细胞治疗目前的成本十分昂贵，在大规模临床应用以前还要做更细致的研究。例如，移植的干细胞可能经常从着床部位迁移，并经历一些细胞转化，导致畸胎瘤的形成。此外，由于它们的大小，干细胞通常被直接注射到中枢神经系统中，引起并发症。侵入性中枢神经系统手术由于分娩期间和分娩后发生的并发症，包括但不限于出血和水肿，使患者处于危险之中。系统地给药的干细胞通常会滞留在小毛细血管中，这可能会在肺中引起不可预计的效果。甚至可能造成疾病或损伤，干细胞治疗也能诱发不良的免疫反应。