[发明专利]一种同时检测血清中13种甾体激素的方法

权利要求书

1.一种同时检测血清中13种甾体激素的方法，其特征在于，

所述13种甾体激素分别为：孕烯醇酮、孕酮、17-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮，11α-羟孕酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、皮质酮、氢化可的松、11-脱氧皮质醇、可的松、醛固酮和雌酮；

具体包括如下步骤：

S1、将待测血清样品与内标溶液混合，通过液-液萃取前处理得到检测液；

S2、采用超高效液相色谱-串联质谱技术对所述检测液进行检测；

所述内标溶液为含孕酮-D₉、17α-羟孕酮-D₈、醛固酮-D₄、皮质酮-D₄、氢化可的松-D₄、11-脱氧皮质酮-¹³C₃和11-脱氧皮质醇-D₅同位素内标物的甲醇溶液；

所述超高效液相色谱条件为：

流动相A为0.1％(v/v)甲酸水溶液；

流动相B为0.1％(v/v)甲酸甲醇溶液；

流动相梯度洗脱参数为：

所述质谱条件为：

模式为正离子模式，采用多反应监测的质谱扫描模式。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱条件具体为：

电离源为电喷雾电离ESI源，其中雾化气流量为1.5-3L/min，干燥气流量为3-16L/min，加热气流量为10-24L/min，接口温度200-400℃，DL温度130-180℃，加热块温度300-380℃；

质谱检测参数为：

优选地，所述质谱检测采用岛津8050三重四极杆质谱仪，同时调节样品喷雾与DL管的距离，具体为，将电喷雾离子源喷针的安装位置调整到最佳位置+3处。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述流动相梯度洗脱参数为：

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.4ml/min，色谱柱的柱温为40℃。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述加热气流量为15L/min，接口温度300℃，DL温度150℃，加热块温度350℃。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤S1中，所述前处理为使用甲基叔丁基醚和甲醇溶液进行液-液萃取前处理；

优选地，所述前处理具体包括：向待测血清样品与内标溶液的混合液中加入800-1000μL甲基叔丁基醚，震荡后在10000-15000r/min、2-5℃下冷冻离心2-6min，取上层清液400-800μL，N₂气吹干，加入80-150μL的50-70％甲醇溶液复溶，混合均匀，在10000-15000r/min、2-5℃下冷冻离心2-6min，取上层清液，得到所述检测液。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，还包括，结合步骤S2得到的检测结果和各甾体激素的标准工作曲线，得到各甾体激素在血清中的含量值。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述甾体激素的标准工作曲线采用同位素内标定量法制得，具体步骤包括，

将已知且不同浓度的孕烯醇酮、孕酮、17-羟孕烯醇酮、17α-羟孕酮，11α-羟孕酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、皮质酮、氢化可的松、11-脱氧皮质醇、可的松、醛固酮和雌酮的甲醇溶液分别与内标溶液和空白血清基质混合，经过前处理得到不同浓度的标准待测液，使用超高效液相色谱-串联质谱技术对所述不同浓度的标准待测液分别进行检测，以标准检测液中各甾体激素与内标物峰面积比为Y轴，标准检测液中各甾体激素浓度为X轴，得到各甾体激素的标准工作曲线；所述超高效液相色谱-串联质谱技术中的检测条件为步骤S2中的检测条件。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述空白血清基质为0.1％牛血清白蛋白溶液。