[发明专利]一种藻类小分子肽提取方法

说明书

本发明涉及一种蛋白多肽技术领域，具体是一种藻类小分子肽提取方法。本发明将藻类溶于水后超声破碎，使藻类中的蛋白等有益成分溢出，再使用漆酶、碱性蛋白酶、普鲁兰酶、丝氨酸蛋白水解酶对破碎后的混合溶液进行碱、酸交替酶解使藻类中的蛋白得到充分解离，再进行超滤后干燥，本发明的方法拥有极高的小分子肽提取率，大大提升了藻类的利用率，减少了物料浪费，又拥有较快的提取速度，是一种高效、简便、快捷的藻类小分子肽提取方法。

技术领域

本发明涉及一种蛋白多肽技术领域，具体是一种藻类小分子肽提取方法。

背景技术

小分子肽是介于氨基酸与蛋白质之间一种生化物质，它比蛋白质分子量小，又比氨基酸分子量大，是一个蛋白质的片段。两个以上的氨基酸之间以肽键相连，形成的“氨基酸链”或“氨基酸串”就叫做肽。其中，10-15个以上氨基酸组成的肽被称为多肽，而由2至9个氨基酸组成的就叫做寡肽，由2至15个氨基酸组成的就叫做小分子肽或小肽。藻类含有十分丰富的各种人体必需的营养成分，能从其中提取大量的小分子肽，从其中提取的小分子肽能突破目前藻类提取物溶解性差、腥味重的局限，并且更利于人类吸收，具有较好的免疫调节、抗氧化、降血压、抗菌等功能。

近些年来，随着科学技术的发展，人们生活水平的不断提高，天然活性物质与功能肽成为当前研究的热点，如抑菌肽、抗氧化肽、降压肽等在医药保健、食品加工和化妆品领域具有广泛的应用空间，然而，一般多肽的提取技术路线为①首先将含有蛋白质的材料进行预处理如溶解，超声波处理、反复冻融等；②将其上清液进行酶解或双酶解等；③透析除去盐分；④超滤法；⑤凝胶层析；⑥高效液相色谱法和电泳法等，才可获得需要的肽段。据报道天然活性肽分子量大多为5000D以下，要想获得这样的小分子多肽必须进行上述步骤的研究和分析。这些工作技术要求高，仪器设备要求复杂，需要时间长，就是熟练的技术人员也需要几天或几周的时间，不太熟悉的技术人员要完成小分子多肽的提取就需要更长的时间。更为重要的是活细胞的多肽经过这样漫长的提取、分离纯化过程，已部分地失去了原有的活性，造成事倍功半。

因此，寻找一种高效、简便、快捷的藻类小分子肽提取方法是当务之急。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种高效、简便、快捷的藻类小分子肽提取方法，具体内容如下：

一种藻类小分子肽提取方法，包括如下步骤：

(1)称取清洗干净的藻类，用水溶解，使藻类均匀分散在水中，得到；

(2)将混有藻类的水溶液进行超声破碎；

(3)将超声破碎后的混合溶液ph调至9.2-9.8，向其中加入漆酶、碱性蛋白酶、普鲁兰酶，搅拌均匀，在35-55℃下酶解1-4h，将混合溶液中的酶灭活；

(4)将灭酶活后的混合液调ph至6.1-6.6，加入胃蛋白酶，在40-45℃下酶解20-40min，将混合溶液中的酶灭活；

(5)将灭酶活后的混合液进行超滤；

(6)将超滤后的浓缩、干燥后即得。

优选的，所述步骤(1)中，控制料液比20-60g/L。此料液比较为适中，适宜后续破碎操作进行。

优选的，所述步骤(2)的超声破碎，是在0-10℃下，用20-40KHz的频率进行超声破碎。此温度和频率进行超声破碎的效果较好，破碎速度较快，并且造成的损失较小。

优选的，所述步骤(3)，其中酶的具体加入量为漆酶0.24-0.36g/L、碱性蛋白酶0.65-0.85g/L、普鲁兰酶0.18-0.22g/L。此加入量较为适中，能使藻类中的蛋白得到充分酶解，并且不会造成物料浪费。

优选的，所述碱性蛋白酶，是枯草杆菌碱性蛋白酶。枯草杆菌蛋白酶是芽孢杆菌属细菌所分泌的胞外碱性蛋白酶，属丝氨酸蛋白水解酶类，其对藻类中的蛋白分解效果较好。