[发明专利]一株解淀粉芽胞杆菌生防功能基因序列及其应用

说明书

本发明涉及一株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18的生防功能基因序列。野生生防菌株解淀粉芽胞杆菌Bs‑18防治黄瓜白粉病菌大田防治效果达79.2%，通过构建Bs‑18的突变体文库，从突变体库中筛选到一株生防功能发生明显变化的突变体T4‑7，反向PCR方法获得其插入基因片段的序列。为了验证此基因片段与生防作用相关，通过电击转化的方法获得了基因恢复株，大田防治试验结果表明基因恢复株的生防效果高于T4‑7菌株，但又略低于野生生防菌株Bs‑18。由此说明此基因片段与生防菌株Bs‑18的生防作用相关，可以达到防治黄瓜白粉病菌的目的。

技术领域

本发明属于生防控制技术领域，涉及一株解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18的生防功能相关的基因，具体内容涉及一株优良的解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18的生防功能基因序列。

背景技术

随着许多微生物基因组全序列的获得，人们对微生物关注和研究的热点逐渐从结构基因组学转移到功能基因组学上。转座子随机突变技术因操作简单逐渐成为研究功能基因组（如发现新基因、克隆功能基因、发掘已知基因的新功能）的一种有效工具。目前利用转座子随机突变技术获得了枯草芽胞杆菌与芽孢形成、生物被膜形成以及植物与微生物互作等相关的基因。可见转座子突变技术已成为发现功能基因的一种有效手段。穿梭质粒载体pMarA 上携带转座子 TnYLB-1，它具有转座频率高、插入稳定、随机插入、非寄主专化性等优点，已成为人们研究细菌基因功能的首选转座子。

解淀粉芽胞杆菌具有抗菌谱广，对人畜无毒，不污染环境，抗逆能力强，稳定性好等优点，作为生防菌株应用于农业生产，在农作物病害的生物防治方面发挥着重要的作用。本实验室从黄瓜根际土壤中分离到一株解淀粉芽胞杆菌Bs-18，对黄瓜白粉病的大田防效达79.2%，从分子水平揭示生防菌株发挥生防作用的机制，获得生防作用相关的基因序列，将为生防菌株的改造、新基因的发掘及有效使用提供理论基础。

发明内容

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一株解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列，如SEQ ID NO.1所示，其所对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明进一步公开了用于解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能基因序列构建的特异性引物，其特征在于：

T4-7 Fwd GGCGGATCCGTCCGTTTCATAAGTTGACAAGACG SEQ ID NO.3；

T4-7Rev GCCGAATTCCAAAGGAAGTGGCAGCGAATG SEQ ID NO.4。

本发明更进一步公开了一株用于构建解淀粉芽胞杆菌Bs-18的生防功能突变体，菌株命名为T4-7，其特征在于该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为：CGMCC No.17316；保藏时间为：2019年3月8日。所述的突变株T4-7为解淀粉芽孢杆菌Bs-18被TnYLB-1转座子随机插入的突变株。

突变株T4-7由天津市植物保护研究所植物病害生物防治研究室筛选得到，T4-7被中国科学院微生物研究所鉴定为一株解淀粉芽胞杆菌（Bacillus amyloliquefaciens），并保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏登记号为：CGMCC No.17316；保藏时间为：2019年3月8日。中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

解淀粉芽胞杆菌突变株（Bacillus amyloliquefaciens）命名为T4-7的生理生化特性如下：菌株T4-7为从土壤中分离出的野生解淀粉芽胞杆菌菌株Bs-18被转座子TnYLB-1随机插入的突变体菌株，为革兰氏阳性芽胞杆菌，具有解淀粉能力。菌株在LB培养基上菌落半透明状，在干燥情况下菌落有褶皱，边缘界限明显。生长温度30℃—36℃生长良好。