[发明专利]一种葵花抗氧化活性肽的制备方法

说明书

本发明提供了一种葵花抗氧化活性肽的制备方法，涉及葵花肽的制备技术领域。本发明所述制备方法以脱脂葵花粕为原料，经盐溶酸沉法制得葵花分离蛋白。葵花分离蛋白经蛋白酶水解后产生具有抗氧化活性的多肽混合物，然后采用超滤、离子交换层析、凝胶层析和反相色谱法对其进行分离纯化，得到葵花抗氧化活性肽产品。利用本发明所述制备方法可得到四种新的高纯度高活性葵花抗氧化寡肽。

技术领域

本发明属于葵花肽的制备技术领域，具体涉及一种葵花抗氧化活性肽的制备方法。

背景技术

葵花粕是一种优质的植物蛋白来源，其必需氨基酸含量丰富，氨基酸组成合理，是营养价值较高的蛋白质，葵花蛋白拥有较高的消化率和生物价。另外，葵花蛋白具有良好的吸油性、起泡性、起泡稳定性、乳化活力和乳化稳定性等功能特性，是食品工业理想的添加剂。但到目前为止，葵花粕主要被用作饲料，还没有像大豆蛋白那样得到广泛应用，开发的葵花蛋白产品也很少。

目前，关于葵花肽的制备方法及其应用主要包括：中国专利 CN103250864A“一种葵花籽多肽的制备方法”，以低温脱脂葵花粕为原料，经碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶混合酶液水解，固液分离后经浓缩、喷雾干燥制备葵花籽多肽粉；中国专利CN103933007A“葵花籽粕多肽泡腾片及其制备方法”，主要以具有抗氧化及延缓衰老作用的葵花多肽为功能性原料，加入枸橼酸、碳酸氢钠、聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、β-环糊精等辅料制成多肽泡腾片；以及中国专利CN106889303A“一种葵花籽肽粉的生产工艺”，以脱脂葵花粕为原料，经蛋白酶水解后，浓缩、干燥制得葵花籽肽粉。纵观葵花肽的多种制备方法，都是以葵花粕为原料，制备得到的葵花肽纯度较低，且提纯困难。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种葵花抗氧化活性肽的制备方法，制备得到的葵花寡肽具有高纯度且抗氧化活性高的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种葵花抗氧化活性肽的制备方法，包括以下步骤：(1) 利用体积浓度为95％的乙醇溶液醇洗两次脱脂葵花粕，风干8～12h后，得葵花浓缩蛋白；

(2)将所述葵花浓缩蛋白与盐溶液混合溶解2h后离心，调节上清液pH 值至酸性后，再次离心，得蛋白沉淀；所述盐溶液中包括体积分数分别为 8～15％的NaCl和0.2～0.35％的Na₂SO₃；

(3)将所述蛋白沉淀溶于水，调节pH值到7，用透析袋进行透析，冷冻干燥后得葵花分离蛋白；

(4)利用蛋白酶酶解所述葵花分离蛋白，得酶解产物；所述蛋白酶包括Flavourzyme酶、Alcalase酶和Protamex酶中的一种或两种的混合；

(5)将所述酶解产物离心后，将上清液依次经过20～50kDa、6～10kDa 和＜6kDa的超滤膜，收集小于6kDa的超滤产物，得超滤液；

(6)将所述超滤液离心后依次进行离子交换层析、Sephadex G-25凝胶过滤层析和ZORBAX SB-C18反相色谱分离，得葵花抗氧化活性肽。

优选的，步骤(1)每次所述醇洗时，所述脱脂葵花粕与所述95％的乙醇溶液的质量体积比为1：(8～12)。

优选的，所述醇洗的温度为48～55℃，每次醇洗的时间为1.5～3h。

优选的，步骤(2)所述离心和再次离心的转速独立的为3500～4500rpm，时间为8～12min。

优选的，步骤(3)所述葵花分离蛋白中粗蛋白含量大于85％。

优选的，步骤(4)所述酶解时的酶解体系中，底物的质量浓度为5～7％，蛋白酶的质量浓度为2～5％，酶解温度为50～60℃，pH值为7.0～8.5，酶解时间为50～70min。