[发明专利]一种葵花抗氧化活性肽的制备方法

权利要求书

1.一种葵花抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用体积浓度为95％的乙醇溶液醇洗两次脱脂葵花粕，风干8～12h后，得葵花浓缩蛋白；每次所述醇洗时，所述脱脂葵花粕与所述95％的乙醇溶液的质量体积比为1：(8～12)；所述醇洗的温度为48～55℃，每次醇洗的时间为1.5～3h；

(2)将所述葵花浓缩蛋白与盐溶液混合溶解2h后离心，调节上清液pH值至酸性后，再次离心，得蛋白沉淀；所述盐溶液中包括体积分数分别为8～15％的NaCl和0.2～0.35％的Na₂SO₃；所述离心和再次离心的转速独立的为3500～4500rpm，时间为8～12min；

(3)将所述蛋白沉淀溶于水，调节pH值到7，用透析袋进行透析，冷冻干燥后得葵花分离蛋白；所述葵花分离蛋白中粗蛋白含量大于85％；

(4)利用蛋白酶酶解所述葵花分离蛋白，得酶解产物；所述蛋白酶包括Flavourzyme酶、Alcalase酶和Protamex酶中的一种或两种的混合；所述酶解时的酶解体系中，底物的质量浓度为5～7％，蛋白酶的质量浓度为2～5％，酶解温度为50～60℃，pH值为7.0～8.5，酶解时间为50～70min；

(5)将所述酶解产物离心后，将上清液依次经过20～50kDa、6～10kDa和＜6kDa的超滤膜，收集小于6kDa的超滤产物，得超滤液；

(6)将所述超滤液离心后依次进行离子交换层析、Sephadex G-25凝胶过滤层析和ZORBAX SB-C18反相色谱分离，得葵花抗氧化活性肽；所述离子交换层析为DEAE-SepharoseFast Flow弱阴离子交换层析，其中φ为1.6*20cm；

ZORBAX SB-C18反相色谱分离进行两次，第一次时的洗脱液A为体积分数分别为0.065％的TFA和2％的乙腈的混合液，洗脱液B为体积分数分别为0.05％的TFA和80％的乙腈的混合液；第二次时的洗脱液A为体积分数分别为0.065％的TFA和10％的乙腈的混合液，洗脱液B为体积分数分别为0.05％的TFA和60％的乙腈的混合液；

所述抗氧化活性寡肽包括如SEQ ID NO.1～4所示的氨基酸序列。