[发明专利]一种高效疏水相互作用色谱介质、制备方法及其在提取丹酚酸B中的应用

说明书

本发明公开一种高效疏水相互作用色谱介质，其结构式如下：，其中，R为或者。同时，还公开了所述色谱介质的制备方法及其在提取丹酚酸B中的应用。本发明所提供的高效疏水相互作用色谱介质，不但能降低丹酚酸B的分离成本，减少了有机溶剂的使用，对环境无污染，而且还可以从丹参中获得高纯度的丹酚酸B，并且丹酚酸B的质量回收率高。

技术领域

本发明属于高效液相色谱技术领域，具体涉及一种高效疏水相互作用色谱介质、制备方法及其在提取丹酚酸B中的应用。

背景技术

以酚酸类为主的丹酚酸B（Salvianolia acid B）是丹参水溶性成分中重要的活性物质。研究发现，丹酚酸B具有很强的生物活性，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，有抗血小板聚集和抗血栓的作用，同时对肾功能不全和肝损伤均有一定保护作用等[Chinese Journal of Natural Medicines（中国天然药物），13 (2015) 163-182；Chinese Journal of Integrative Medicine（中国结合医学杂志），18 (2012) 316-320.]。其中，色谱技术对分离丹酚酸B具有很大的优势，采用流动相为盐-水的洗脱体系，实现了对环境无污染的要求，且操作简单。

高效疏水相互作用色谱法（High Performance Hydrophobic InteractionChromatography，简称HPHIC）是依据其固定相具有适当疏水性基团的疏水作用，在高盐浓度下保留，低盐浓度洗脱的分离机制，易于保持被分离成分的活性，在固定相组成上采用了一些疏水性基团作为配基，如芳基胺、酸酐、PEG（聚乙二醇）等分子，这些配基与活化的硅胶基质表面键合成具有疏水性的固定相。但是，现有的高效疏水相互作用色谱介质疏水强弱不同，丹酚酸B的质量回收率比较低。为了进一步提高目标物的含量，我们对这类介质进行改进。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明提供一种高效疏水相互作用色谱介质、制备方法及其在提取丹酚酸B中的应用，提取的丹酚酸B纯度高，操作简单。

一种高效疏水相互作用色谱介质，结构式如下：

，

其中，R为

或者。

所述高效疏水相互作用色谱介质的制备方法，包括以下步骤：

（1）硅胶活化；

（2）制备环氧化硅胶：按照1g：50mL将步骤（1）得到的活化硅胶加入无水甲苯中，超声处理3-5min，然后在搅拌条件下向其中缓慢加入硅烷偶联剂γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷，所述活化硅胶和硅烷偶联剂的质量体积比为1g:1mL~1g:2 mL，升温至90-120 ℃，回流并搅拌8-10h，然后用甲醇、水、甲醇洗涤抽滤，重复洗涤抽滤5次，在60℃下真空干燥12h，即得到环氧硅胶；

（3）环氧开环制备高效疏水相互作用色谱介质：将苯乙胺或者3-苯基丙胺与步骤（2）得到的环氧化硅胶加入1，4-二氧六环中，超声处理3-5min，80℃回流并搅拌7~8h，然后用甲醇、水、甲醇洗涤抽滤，重复5次，真空干燥，即可；其中，苯乙胺或者3-苯基丙胺、环氧化硅胶、1，4-二氧六环的比例为0.3mL：1g：50mL。

优选地，步骤（1）所述硅胶活化的步骤具体如下：将孔径为90-100Å，粒径为5～10μm的硅胶微球加入体积浓度为20%的盐酸溶液中，在120℃下回流4-6h，冷却后，用蒸馏水洗涤抽滤至中性，在100~150℃真空干燥箱中干燥12~24h，即得到活化硅胶。

所述高效疏水相互作用色谱介质的应用，具体为：将所述高效疏水相互作用色谱介质应用于高效液相色谱来从丹参中提取丹酚酸B。

所述从丹参中提取丹酚酸B的方法具体如下：