[发明专利]一种高效疏水相互作用色谱介质、制备方法及其在提取丹酚酸B中的应用

权利要求书

1.一种高效疏水相互作用色谱介质，其特征在于：所述高效疏水相互作用色谱介质的结构式如下：

，

其中，R为

或者。

2.权利要求1所述高效疏水相互作用色谱介质的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）硅胶活化；

（2）制备环氧化硅胶：按照1g：50mL将步骤（1）得到的活化硅胶加入无水甲苯中，超声处理3-5min，然后在搅拌条件下向其中缓慢加入硅烷偶联剂γ-缩水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷，所述活化硅胶和硅烷偶联剂的质量体积比为1g:1mL~1g:2 mL，升温至90-120 ℃，回流并搅拌8-10h，然后用甲醇、水、甲醇洗涤抽滤，重复洗涤抽滤5次，在60℃下真空干燥12h，即得到环氧硅胶；

（3）环氧开环制备高效疏水相互作用色谱介质：将苯乙胺或者3-苯基丙胺与步骤（2）得到的环氧化硅胶加入1，4-二氧六环中，超声处理3-5min，80℃回流并搅拌7~8h，然后用甲醇、水、甲醇洗涤抽滤，重复5次，真空干燥，即可；其中，苯乙胺或者3-苯基丙胺、环氧化硅胶、1，4-二氧六环的比例为0.3mL：1g：50mL。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述硅胶活化的步骤具体如下：将孔径为90-100Å，粒径为5～10 μm的硅胶微球加入体积浓度为20%的盐酸溶液中，在120℃下回流4-6h，冷却后，用蒸馏水洗涤抽滤至中性，在100~150℃真空干燥箱中干燥12~24h，即得到活化硅胶。

4.权利要求1所述高效疏水相互作用色谱介质的应用，其特征在于：所述应用为将所述高效疏水相互作用色谱介质应用于高效液相色谱来从丹参中提取丹酚酸B。

5.根据权利要求4所述应用，其特征在于：所述从丹参中提取丹酚酸B的方法具体如下：

（1）丹酚酸B粗提样品的制备：将丹参切片，加入纯水中，在45-55℃下浸泡12-18h，然后搅拌2h，静置，用纱布过滤后，再将得到的滤液离心，所得上清液即为丹酚酸B粗提样品；

（2）色谱柱装填：采用湿法匀浆装柱，称取1.5-2.0 g所述高效疏水相互作用色谱介质，以甲醇为匀浆液超声5 min后，在30-40 MPa下，装填色谱柱，30 min后卸下，连接到色谱仪上，在流速1-2 mL/min下用水冲洗三次，每次冲洗1 h；

（3）高纯度丹酚酸B的制备：丹酚酸B粗提样品直接进样至步骤（2）所得的色谱柱中，收集色谱馏分，色谱条件如下：采用流动相A为2-3 mol/L (NH₄)₂SO₄、10 mmol/L KH₂PO₄、pH7.0；流动相B为10 mmol/L KH₂PO₄或H₂O，pH7.0；流速为1.5-2.0 mL/min；采用0-100% 流动相B线性梯度洗脱30 min，100% 流动相B延长10 min；检测波长286 nm；进样量为100-1000μL；

（4）丹酚酸B成品制备与鉴定：将步骤（3）收集的色谱馏分冷冻干燥，得到丹酚酸B成品。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于：步骤（1）中所述丹参与纯水的比例为1g：120mL。

7.根据权利要求5所述应用，其特征在于：步骤（1）中所述离心的具体条件为：离心转速5000-10000 rpm、离心时间15min。

8.根据权利要求5所述应用，其特征在于：步骤（4）中所述冷冻干燥的条件为在-80℃中冷冻10-12h。

9.根据权利要求5所述应用，其特征在于：步骤（2）中，所述色谱柱为100×4.6 mm i.d.的不锈钢色谱柱或者10 ×20 mm i.d的饼型色谱柱。