[发明专利]一种具有抗菌及免疫调节双功能的二聚体多肽及其应用

说明书

本发明公开了一种具有抗菌以及免疫调节双功能的二聚体多肽及其应用，属于生物医药领域。该多肽通过常规的多肽固相合成技术分成两段制备，再通过半胱氨酸侧链的巯基配对形成二硫键，最后通过半制备反向高效液相色谱纯化得到。药理学实验研究结果表明该多肽对革兰氏阳性菌有良好的抑制作用；亦能抑制由脂多糖诱导的鼠源性巨噬细胞RAW264.7中促炎细胞因子TNF‑α、IL‑1β、IL‑6及IL‑17的表达，促进抗炎细胞因子IL‑10的表达。同时，该双功能多肽呈现出低溶血活性，且人工制备便捷、药理活性明确，具有进一步开发价值以及有产业化的潜力。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种具有抗菌及免疫调节双重药理功能的二聚体多肽及其制备方法与应用。

背景技术

自1928年亚历山大·弗莱明(Alexander Fleming)从青霉菌中发现了青霉素以来，包括天然及人工合成的抗菌剂的广泛使用，一方面使得细菌感染性疾病得到了很好的治疗，但另一方面又给菌株带来了巨大的选择压力(抵抗抗生素的能力)。

2016年8月5日，中国发布《遏制细菌耐药国家行动计划(2016-2020年)》(国卫医发[2016]43号)，成为少数具备与抗生素和耐药性作斗争的全面计划的国家之一。复旦大学附属华山医院抗生素研究所牵头组织的中国细菌耐药协作网(China AntimicrobialSurveillance Network,CHINET)自2005年起对22个地区的30余所综合医院/儿童医院收集相关数据整理分析。2005-2017年间所检出菌株的临床样本来源——呼吸道是最重要的样本来源(占比大于40％)，其次为尿液(占比为20％左右)，再次为血液样本和伤口脓液样本。将历年检出的菌株数据按照革兰染色进行分类统计，结果呈现出“阴盛阳衰”的趋势。所检出的菌株中革兰氏阴性菌占比均大于65％，且在2009年后稳定在70％以上，具有绝对的优势。2017年所检出的134952株革兰氏阴性菌株中，检出率排在前六位为病原细菌菌株分别为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌及嗜麦芽窄食单胞菌。对临床样本中所分离到的36 735株大肠埃希菌的药敏实验分析可知，庆大霉素、氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲恶唑、环丙沙星、头孢噻肟、头孢呋辛、派拉西林和氨苄西林的的耐药率均超过40％。肺炎克雷伯菌属的临床分离率呈现逐年上升趋势，同时其耐药情况也不容乐观，其对临床上用于治疗院内获得性肺炎、败血症、腹膜炎以及中性粒细胞减少发热等重症感染患者所使用的碳青霉烯类抗生素(如亚胺培南、美罗培南和厄他培南)耐药率也已超过14％。

对于革兰氏阳性细菌，2017年全国34所医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin Resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出率在10％～65％，平均检出率为35.3％。而耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(Methicillin Resistant Coagulase-Negative Staphylococci,MRCNS)的检出率在48.2％～99.4％，平均检出率高达80.3％。近十余年MRSA和MRCNS的检出率变化趋势为：MRSA的检出率呈现出逐年下降趋势，而MRCNS的检出率虽有小幅波动但总体趋稳(71.6％～82.0％)。2017年CHINET数据所统计结果表明：少数对万古霉素和替考拉宁敏感的MRCNS菌株却对利奈唑胺耐药，而MRCNS对利福平相对较敏感(耐药率仅为13.1％)，对其它抗菌药物的耐药率均接近或大于30％。

目前一些从临床样本中分离出的菌株具有非常强的适应性，对一种或多种抗菌剂均具有抗性。这些耐药菌可导致严重的危及生命的疾病或/和并发症，更为不幸的是，由于缺乏强有力的药物来遏制多药耐药病原细菌的威胁，菌株耐药的威胁在不断增加。这种现状导致医院和社区中现行治疗方案效果不佳，且在治疗细菌感染性疾病时需要使用更高剂量的抗菌剂和/或更长的住院时间。在药物使用上的支出与其产生的效益之间的差距越来越大，因此需要发现新型天然抗菌剂，或使用创新的设计策略人工制备新化学实体(NewChemical Entity)来对抗细菌耐药。