[发明专利]一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法

说明书

一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，本发明涉及一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法。本发明的目的是为了解决现在使用生理盐水进行复苏冷冻的脐带血造血干细胞的前期处理，细胞很容易聚团、细胞碎片增多、活率降低以及细胞数量减少的问题，方法为：一、配置缓冲液；二、去除纤维蛋白的血浆；三、向缓冲液中加入低分子肝素钠、羟乙基淀粉和聚乙二醇；最后加入去除纤维蛋白的血浆，即完成。本发明保护剂能够有效保护细胞的活率，细胞不容易聚团，细胞集落形成较好，能够有效保护复苏后造血干细胞细胞的活性，细胞数量，细胞不聚团，保证集落的形成力；本发明应用于造血干细胞复苏后保护剂的配制领域。

技术领域

本发明涉及一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法。

背景技术

脐血指的是新生儿出生后，经脐带结扎断脐时静脉切开或是穿刺，收集引流获得的胎盘和脐带近胎儿一侧血管内的血液。脐血中间质干细胞和造血干细胞含量较为丰富。脐血造血干细胞是一种原始细胞，具有较强的分化潜能，且形成集落的能力和增殖分化能力，受到特定因素的诱导或是影响，脐血造血干细胞可以分化为各种组织或是细胞。CD34⁺细胞在脐血有核细胞中所占比重在1％左右，这一特征比较接近骨髓，且其含量明显高于外周血。

脐带血因具有来源广泛、采集方便、免疫配型要求低、移植后移植物抗宿主病(GVHD)发生率低等优点,为造血干细胞(HSC)的重要来源之一,为需要接受异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的患者提供1种可靠的HSC来源。脐血和脐带来源的干细胞除了可以治疗血液疾病外，还能用于自身免疫性疾病、黏多糖病等其他疾病，如可以用来治疗恶性肿瘤疾病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、多发性骨髓瘤、骨髓异常增殖综合症等、血红蛋白与血液异常病(如地中海性贫血)、先天性代谢性疾病、先天性免疫缺陷疾患、自身免疫性疾患(如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮)、某些实体肿瘤(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤等)。

自1989年Gluckman等在世界上首例用脐血造血干细胞代替骨髓移植治疗Fanconic贫血获得成功。大量研究表明，脐血中多能造血干细胞比较高，并含有一定量发育不成熟的前身辅助T细胞和前身细胞毒T细胞，这些T细胞亚群的发育不成熟表型表达不足，对同种异体抗原的应答能力较弱，使得脐血移植后GVHD的发生较少而不太严重，另外由于其免疫学上的不成熟还可使供体和受体HL匹配范围更大，加之脐血容易采集，制备提取有核细胞后能够在液氮中长期保存不失其特性，急用时可立即获取。脐血造血干细胞(HSCs)在扩增能力和免疫反应性方面较骨髓HSCs具有显著的优越性，而且脐血无伦理学限制，应用脐血干细胞移植(CBSCT)治疗造血系统疾病，重建造血能力，已取得较好的临床效果。

脐血造血干细胞移植技术具有较高的临床应用价值，以及广阔的应用前景，然而，这一治疗技术还存在部分有待于进一步解决的难题，包括急性移植物抗宿主病和复发、移植后免疫重建延迟、单份脐血中造血干细胞数量有限等。目前CBSCT存在的主要问题是单份脐血所含HSCs数量少，由于脐带血的体积小、细胞数量有限,其所含的造血干/祖细胞(HS/PC)数量有限,往往不能满足高体重儿童及成年患者allo-HSC移植使用，利用脐血干细胞具有的高增殖和体外扩增潜能，有可能解决单份脐血HSCs数量不足的限制。

发明内容

本发明的目的是为了解决现在使用生理盐水进行复苏冷冻的脐带血造血干细胞的前期处理，细胞很容易聚团、细胞碎片增多、活率降低以及细胞数量减少的问题，提供了一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法。