[发明专利]一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法

权利要求书

1.一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于该配制方法按以下步骤进行：一、配置缓冲液：称取氯化钠3～3.5g、氯化钾0.1～0.2g、氯化镁0.1～0.2g、醋酸钠1～1.5g、枸橼酸钠0.2～0.3g、葡萄糖酸钙0.3～0.4g和海藻糖0.2～0.3g；然后将氯化钠、氯化钾、氯化镁、枸橼酸钠依次溶于480～520mL去离子水中，搅拌至完全融化，加入葡萄糖酸钙和海藻糖，搅拌至溶解，静止8～12min，加入醋酸钠，搅拌均匀，静止4～6min,调节pH值在7.0-7.2之间，得到缓冲液；二、去除纤维蛋白的血浆：向血浆中加入氯化钙溶液，振摇4～6min，通过密度梯度离心，取液相，得到去除纤维蛋白的血浆，于4℃低温或-20℃冷冻保存；三、向步骤一配置的缓冲液中加入低分子肝素钠，混匀，加入羟乙基淀粉，混匀，加入聚乙二醇，混匀后，4℃预冷，得到保护剂，保护剂中低分子肝素钠终浓度为14-16mol/mL；羟乙基淀粉终浓度为9-11mol/mL，聚乙二醇的体积浓度为2-3％；四、向步骤三配制的保护剂中加入去除纤维蛋白的血浆，去除纤维蛋白的血浆和保护剂的体积比为1：4，即得到用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤一中称取氯化钠3.12g、氯化钾0.15g、氯化镁0.11g、醋酸钠1.025g、枸橼酸钠0.254g、葡萄糖酸钙0.322g和海藻糖0.25g。

3.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤一中将氯化钠、氯化钾、氯化镁、枸橼酸钠依次溶于500mL去离子水中。

4.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤一中加入葡萄糖酸钙和海藻糖，搅拌至溶解，静止10min，加入醋酸钠，搅拌均匀，静止5min。

5.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤一中采用质量浓度为1％的氢氧化钠或质量浓度为1％的盐酸调节pH值至7.0-7.2。

6.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤二中血浆和氯化钙溶液的比例为1:8。

7.根据权利要求1或6所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于步骤二中氯化钙溶液的质量浓度为1％。

8.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于保护剂中低分子肝素钠终浓度为15mol/mL；羟乙基淀粉终浓度为10mol/mL。

9.根据权利要求1所述的一种用于冷冻的脐带血造血干细胞复苏后保护剂的配制方法，其特征在于保护剂中聚乙二醇的体积浓度为2.5％。