[发明专利]一种用于治疗支气管哮喘的复合壳聚糖纳米微粒及其应用有效
申请号: | 201910315784.X | 申请日: | 2019-04-19 |
公开(公告)号: | CN109966509B | 公开(公告)日: | 2020-08-04 |
发明(设计)人: | 王彦;毕玉田;郭东霖;黄丽云;王斌 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军陆军军医大学第二附属医院 |
主分类号: | A61K48/00 | 分类号: | A61K48/00;A61K9/50;A61K47/36;A61P11/06;A61K39/35 |
代理公司: | 重庆华科专利事务所 50123 | 代理人: | 康海燕;王艳 |
地址: | 400037 重*** | 国省代码: | 重庆;50 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 用于 治疗 支气管哮喘 复合 聚糖 纳米 微粒 及其 应用 | ||
1.一种用于治疗支气管哮喘的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述复合壳聚糖纳米微粒是采用壳聚糖(CS)包裹甘油二酯激酶α基因(DGKα基因)表达载体和卵清蛋白(OVA)形成的纳米微粒;DGKα基因表达载体和OVA的质量比为2-12.24:1;DGKα基因表达载体和CS的质量比为0.05-0.36:1。
2.如权利要求1所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述复合壳聚糖纳米微粒的直径为200~500nm。
3.如权利要求1所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述复合壳聚糖纳米微粒中,壳聚糖骨架中带正电荷的NH2/DGKα基因表达载体中带负电荷的磷酸根的摩尔比例比大于5。
4.如权利要求2所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述DGKα基因表达载体是通过将全基因小鼠IL-2信号肽序列和小鼠DGKα基因的融合基因克隆到真核表达载体的DGKα质粒。
5.如权利要求1-4任一项所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述复合壳聚糖纳米微粒的制备方法包括如下步骤:
(1)采用质量百分数为1-2%的醋酸溶液配制浓度为1.0~2.0mg/mL的壳聚糖醋酸溶液,NaOH调节pH至5.5~5.7,除菌,得无菌的CS溶液;
(2)采用10mM的无菌无水硫酸钠溶液配制浓度为100~360μg/mL DGKα基因表达载体溶液;
(3)配制浓度为5mg/mL的OVA水溶液;
(4)漩涡振荡条件下,按CS溶液和OVA水溶液的体积比为100~170:1向壳聚糖溶液中加入OVA水溶液,继续震荡得CS-OVA溶液;
(5)CS-OVA溶液和DGKα基因表达载体溶液分别水浴加热至55℃,漩涡振荡条件下,按CS-OVA溶液和DGKα基因表达载体溶液的体积比为1:1向CS-OVA溶液中加入DGKα基因表达载体溶液,继续震荡,室温静置得CS-DGKα-OVA微粒。
6.如权利要求5所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述壳聚糖醋酸溶液的浓度为1.5mg/mL,所述DGKα基因表达载体溶液的浓度为360μg/mL。
7.如权利要求5所述的复合壳聚糖纳米微粒,其特征在于,所述步骤(4)中,所述CS溶液和OVA水溶液体积比为500:3。
8.权利要求1-6任一项所述的复合壳聚糖微粒在制备治疗和/或预防支气管哮喘药物和/或保健品中的应用。
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