[发明专利]一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用，属于免疫学领域。所述制备方法，包括下述步骤：化学合成SEQ ID NO.1所示五邻体基因序列；制备重组pFastBac‑1‑penton载体；用制备的重组pFastBac‑1‑penton载体转染sf9细胞，在sf9细胞表达得到重组蛋白；对得到的重组蛋白经Ni‑NTA纯化后得到纯化的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。所述血清4型禽腺病毒五邻体蛋白由上述制备方法制得。所述的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白在制备预防禽腺病毒疫苗中的应用。本发明具有以下优点：基因合成无需模板，更经济、简便；更能提高penton的表达量；易于工业化规模生产。

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

I群血清4型禽腺病毒可引起鸡心包积液肝炎综合征，是侵害鸡的一种急性传染病，主要病变为心包腔有清亮或淡黄色的水样或果冻状液体，肝脏肿大、局部坏死或褪色甚至有出现包涵体，可通过水平传播或垂直传播，发病率和致死率很高。1987年巴基斯坦首次报道了由I群血清4型禽腺病毒引起的心包积液肝炎综合征，2012年在我国出现，至2014年己形成大面积流行，2015-2016年已传播至全国。目前该病在我国鸡群中的发病率较高，且呈逐渐上升趋势。感染宿主的范围也越来越广，白羽肉鸡、三黄鸡、土鸡、种鸡、蛋鸡、种鸭均可感染发病。发病死亡情况因地区、品种而异，给我们畜牧业造成了很大经济损失。

禽腺病毒为无囊膜的裸体病毒，近球形，直径约70～90nm。电镜观察，其形态为正20面体，衣壳由252个中空壳粒构成，其中有12个五邻体(penton)分别位于该病毒12个顶上，240个六邻体(hexon)分别位于20个三角面和30条棱上。其中penton可与细胞表面的病毒受体结合，在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用。Penton保守型较好，能刺激机体产生抗体，因此penton蛋白在防控禽腺病毒4型感染等方面具有重要意义。

目前表达penton蛋白多采用原核表达系统，一方面蛋白的活性难以保证，另一方面内毒素的去除增加了成本。

发明内容

针对上述问题，本发明采用杆状病毒表达系统进行表达，一方面解决了蛋白活性问题，另一方面sf9细胞容易放大和悬浮培养，易于工业化规模生产。

本发明的目的在于公开了一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白的制备方法。

本发明第二个目的在于公开了上述制备方法制得的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。

本发明第三个目的在于公开了所述血清4型禽腺病毒五邻体蛋白的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种血清4型禽腺病毒五邻体蛋白的制备方法，包括下述步骤：

(1)、化学合成SEQ ID NO.1所示的penton基因；

(2)、制备重组pFastBac-1-penton载体；

(3)、用步骤(2)制备的重组pFastBac-1-penton载体转染sf9细胞，在sf9细胞表达得到重组蛋白；

(4)、对步骤(3)得到的重组蛋白经Ni-NTA纯化后得到纯化的血清4型禽腺病毒五邻体蛋白。

上述技术方案所述的制备方法，其中，所述步骤(2)的具体步骤为：

(ⅰ)、在目的基因penton基因的N端添加his标签，得到序列SalI位点-ATG-His标签-FAV4-penton基因CDS-去终止密码子-终止子-HindIII位点；