[发明专利]一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供了一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒及检测方法，该技术方案以首先探究了RA患者基因表达情况与病理特征之间的关系，研究发现，不同活动期间RA患者外周血单个核细胞中的ATG5、ATG8、Beclin1基因的mRNA相对表达水平呈不同程度的表达差异，表现出外周血单个核细胞Beclin1和Atg8等相关自噬基因的表达变化对RA的预后及活动具有一定的相关性和指向性。基于以上积极的发现，本发明开发了一种基于自噬性基因检测的RA辅助诊断试剂盒，该试剂盒以人的血清、血浆或其它体液作为生物检材，采用竞争抑制ELISA法定量测定其中ATG5、ATG8、Beclin1含量，可以此为依据来实现RA的辅助检查，并评价RA的病理特征和发展进程。

技术领域

本发明涉及疾病诊断试剂盒技术领域，进一步涉及基于基因检测的疾病辅助诊断技术，具体涉及一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒及检测方法。

背景技术

类风湿关节炎(RA)是一种病因未明的慢性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。RA关节炎的病理主要有滑膜衬里细胞增生、间质大量炎性细胞浸润，以及微血管的新生、血管翳的形成及软骨和骨组织的破坏等。症状多表现为手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。RA的发病可能与遗传、感染、性激素等有关，诊断标准包括以下一系列特征：1)晨僵≥30分钟；2)大于3个关节区的关节炎；3)手关节炎；4)类风湿因子(RF)阳性；5)抗CCP抗体阳性。14个关节区包括：双侧肘、腕、掌指、近端指间、膝、踝和跖趾关节；以上特征满足3条以上可诊断为RA。

近年来，随着分子生物学和医学影像学的发展，其他检测依据被引入了RA的诊断中，例如，RA患者自身抗体的检出，是RA有别于其他炎性关节炎，如银屑病关节炎、反应性关节炎和骨关节炎的标志之一，目前临床常用的自身抗体包括类风湿因子(RF-IgM)、抗环状瓜氨酸(CCP)抗体、类风湿因子IgG及IgA、抗核周因子、抗角蛋白抗体，以及抗核抗体、抗ENA抗体等，同时，还包括抗RA33抗体、抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体，抗P68抗体等。此外，通过X射线可见软组织肿胀、骨质疏松及病情进展后的关节面囊性变、侵袭性骨破坏、关节面模糊、关节间隙狭窄、关节融合及脱位。MRI检查手关节及腕关节的MRI检查可提示早期的滑膜炎病变，对发现类风湿关节炎患者的早期关节破坏很有帮助，超声关节超声是简易的无创性检查，对于滑膜炎、关节积液以及关节破坏有鉴别意义。

目前RA缺乏直接、有效的预防和治疗策略，缺乏高敏感性、特异性的诊断指标。临床上关节滑膜组织虽可通过手术或者穿刺留取，由于取材的有创性,使其应用受到一定限制。有研究表明，在RA的发病过程中，伴随着基因表达的改变，在这种情况下，如果能确切获得基因表达情况与RA病理特征间的关系，则有望成为RA诊断的新依据，基于基因表达情况的RA诊断方法，在稳定性和准确性方面更加可靠，然而，由于相关研究的缺失，目前尚不掌握对RA具有确切指向性的基因类别，也不清楚其表达水平与RA病理特征之间的关系。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒及检测方法，以解决现有技术中，缺乏一种基于基因检测手段的、RA辅助诊断试剂盒的技术问题。

本发明要解决的另一技术问题是，RA的病理进程与患者自噬性基因表达情况间的关系尚不明显。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，包括：分别包被有ATG5抗原、ATG8抗原、Beclin1抗原的孔板；阳性质控：ATG5阳性血清，ATG8阳性血清，Beclin1阳性血清；阴性质控：健康人阴性血清；工作液R：标记有HRP的抗人ATG5抗体，标记有HRP的抗人ATG8抗体，标记有HRP的抗人Beclin1抗体；稀释液：去离子水；TMB底物；终止液：1mol/L的H₂SO₄溶液；浓缩清洗洗涤液：PBS-Tween缓冲液。