[发明专利]一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于包括：

分别包被有ATG5抗原、ATG8抗原、Beclin1抗原的孔板；

阳性质控：ATG5阳性血清，ATG8阳性血清，Beclin1阳性血清；

阴性质控：健康人阴性血清；

工作液R：标记有HRP的抗人ATG5抗体，标记有HRP的抗人ATG8抗体，标记有HRP的抗人Beclin1抗体；

稀释液：去离子水；

TMB底物；

终止液：1mol/L的H₂SO₄溶液；

浓缩清洗洗涤液：PBS-Tween缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述孔板为96孔板。

3.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述ATG5阳性血清，ATG8阳性血清，Beclin1阳性血清各为50μL。

4.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述健康人阴性血清为50μL。

5.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述标记有HRP的抗人ATG5抗体，标记有HRP的抗人ATG8抗体，标记有HRP的抗人Beclin1抗体各为150μL。

6.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述去离子水的体积为工作液R总体积的100倍。

7.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述TMB底物有15份，每份为100μL。

8.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述终止液有15份，每份为50μL。

9.根据权利要求1所述的一种类风湿性关节炎辅助诊断试剂盒，其特征在于所述浓缩清洗洗涤液有20份，每份为250μL。

10.一种应用权利要求1所述的试剂盒检测类风湿关节炎的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)加样：将孔板上的孔划分为标准孔，待测样品孔，空白孔，其中所述标准孔有3孔，向3个标准孔中分别加入3种阳性质控，每种阳性质控各50μL，空白孔加50μL阴性质控，待测样品孔中加入待测样品50μL；每孔加工作液R150μL，振动混匀，孔板加覆膜，于37℃温育1小时；

2)弃去孔内液体，每孔用250μL的浓缩清洗洗涤液洗涤，浸泡1分钟，而后清除孔内所有液体；重复洗板3次，最后一次洗涤后，倒出剩余的浓缩清洗洗涤液，将酶标板倒扣在吸水纸上，将残留在孔内的液体全部吸干；

3)每孔加TMB底物100μL，酶标板加上覆膜，于37℃避光显色10～30min；

4)每孔加终止液50μL，终止反应。