[发明专利]一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法

说明书

本发明公开了一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法。该方法以铁皮石斛幼嫩茎段为外植体瞬时表达外源早花基因；包括以下步骤：（1）幼嫩茎段采集及消毒，（2）预培养，（3）农杆菌侵染及共培养，（4）不定芽培养，（5）生根培养，（6）壮苗生根和炼苗移栽，（7）植株开花情况观察。该方法铁皮石斛再生植株的获取途径不经过原球茎阶段，缩短了培养周期；预培养时拨去了膜质叶鞘有助于农杆菌的侵染，使铁皮石斛童期缩短，提前开花，开花率显著增高。

技术领域

本发明属于铁皮石斛开花技术领域，具体涉及一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法。

背景技术

铁皮石斛（Dendrobium cantenatum）又称黑节草，为兰科石斛属(Dendrobium)多年生附生性草本植物，具有益胃生津和抗菌消炎等药用价值，由于其自然繁殖力很低，时间较长，市场上基本以试管苗为主。尽管其花色素雅，姿态优美，观赏价值高，一直以来药食用铁皮石斛是其主要市场，但近年来市场变动导致生产商收入减少，因此观赏性铁皮石斛的应用推广是产业出路，但是由于观赏性铁皮石斛童期时间为 3-4 年不仅影响了其观赏性，也使得育种过程十分耗时。显然，打破童期限制，提早开花的技术对于铁皮石斛等兰科观赏植物来说应用前景十分广阔。

FLOWERING LOCUS T（FT）是植物花期调控途径中最关键的基因，它位于各个成花途径如光周期途径、春化途径和自主途径中的下游，是整合来自不同花发育途径的信号网络中关键分子之一。FT受上游基因CO的调控，并通过其下游AP1、SOC1等花分生组织决定基因的作用来促进植物的开花。该基因表达水平的提高，对植物开花具有促进作用。

目前有关石斛兰开花调控研究大多为使用激素调控手段或者改变外部环境条件调节植物花期，不但成本高而且费时费力。使用分子生物学方法缩短植物童期简便且经济，然而目前利用分子技术调控开花在兰花的研究目前仍较少。

发明内容

本发明旨在提供一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法。该方法铁皮石斛再生植株的获取途径不经过原球茎阶段，缩短了培养周期；预培养时拨去了膜质叶鞘有助于农杆菌的侵染，使铁皮石斛童期缩短，开花率显著增高。

一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法，以铁皮石斛幼嫩茎段为外植体瞬时表达外源早花基因；包括以下步骤：（1）幼嫩茎段采集及消毒，（2）预培养，（3）农杆菌侵染及共培养，（4）不定芽培养，（5）生根培养，（6）壮苗生根和炼苗移栽，（7）植株开花情况观察。

一种促进铁皮石斛提前开花的分子方法，包括以下具体步骤：

（1）幼嫩茎段采集及消毒：选取长势良好、均匀，叶片健康的铁皮石斛幼嫩茎段和叶片，自来水冲洗10 min 后备用；在紫外线照射 20 min 灭菌过的超净工作台上，先用75vol% 酒精浸泡30s，后用50 mL 0.1wt%升汞加1μL一滴吐温80的混合液消毒 8 min，间隔震荡确保外植体与消毒液充分接触，无菌水冲洗6-7次保证去除残留消毒物质，置于无菌水中待用；

（2）预培养：用手术刀将消毒后的幼嫩茎段切成长度为1-1.5 cm带有芽眼的茎段，用镊子轻轻将膜质叶鞘拨去，接种于不定芽诱导培养基上预培养7天；