[发明专利]一种筛选和/或评价物质的方法及其应用有效
| 申请号： | 201910310805.9 | 申请日： | 2019-04-17 |
| 公开（公告）号： | CN110031613B | 公开（公告）日： | 2020-06-23 |
| 发明（设计）人： | 梁小星;费凡;殷诺雅 | 申请（专利权）人： | 中国科学院生态环境研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/0735 | 分类号： | C12N5/0735 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 崔亚松;张莹 |
| 地址： | 100085*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 筛选 评价 物质 方法 及其 应用 | ||
1.一种筛选和/或评价物质的方法，包括以下步骤：
(1)在Vitronectin包被的培养皿中利用mTeSR1培养基对人胚胎干细胞H9进行支持培养；
(2)制备细胞球，并在含有待测物质的分化培养基中进行分化培养得到包含内、中、外三个胚层细胞的腔状拟胚体；
所述细胞球的制备方法包括将步骤(1)中得到的胚胎干细胞消化成单细胞悬液，然后在分化培养基中进行单细胞接种；所述分化培养基包括：DMEM/F-12培养基、胰岛素、维生素C磷酸酯镁、转铁蛋白、硒酸钠和DNA酶；
(3)通过分析胚胎发育的指标筛选和/或评价所述物质。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述分化培养基中各组分的含量为：胰岛素19.4μg/L、维生素C磷酸酯镁64mg/L、转铁蛋白10.7mg/L、硒酸钠14μg/L和DNA酶1mg/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，单细胞的接种密度为1.8×106cells/mL至9.0×106cells/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其中，单细胞接种的第一天，使用的分化培养基包括ROCK1抑制剂Y27632。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述分化培养基中Y27632的含量为10μM。
6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述物质包括环境污染物、药物、小分子抑制剂中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述指标包括基因表达水平、DNA甲基化水平、蛋白表达水平、代谢产物中的一种或多种。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，分析胚胎发育的指标的方法包括基因组学、蛋白组学、代谢组学中的一种或多种。
9.根据权利要求1所述的方法，其中，分析胚胎发育的指标的方法包括表观基因组学。
10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括分析不同时间点不同胚层中发育相关的基因表达水平以评价物质的影响或效应。
11.根据权利要求6所述的方法，其中，所述物质包括双酚类化合物、全氟化合物、PM2.5、黄酮类化合物中的一种或多种。
12.一种权利要求1-11中任一项所述方法在诱导胚胎干细胞定向分化中的应用。
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