[发明专利]一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法

说明书

本发明公开了一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，属于农业技术领域。所述对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，包括如下步骤：步骤1：收集待鉴定的种质材料；步骤2：选取对步骤1待鉴定的种质材料具有嫁接亲和力且感染黄龙病菌的柑橘树，作为高接树；步骤3：高接；步骤4：田间管理；步骤5：田间症状观察；步骤6：实时荧光定量PCR检测；步骤7：结果评价。本发明首次提出了将待鉴定的种质材料直接高接于柑橘黄龙病树上进行抗性或耐性的鉴定，国内外未见有其它相关类似的报道。

技术领域

本发明涉及一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，属于农业技术领域。

背景技术

黄龙病(Huanglongbing)是一种世界范围的柑橘毁灭性细菌病害，其病原物为韧皮部限制性难培养细菌，到目前已发现三个种：亚洲种(Candidatus Liberibacterasiaticus)、非洲种(Ca.L.africanus)和美洲种(Ca.L.americanus)，其中亚洲种发生流行最为广泛，在我国发生流行的也是亚洲种。黄龙病每年对我国柑橘产业造成的经济损失高达数十亿。

感染黄龙病初期，植株新抽出的枝梢叶片在接近成熟时停止转绿，在树冠顶部形成明显的“黄梢”，受害的叶片主要表现为3种类型症状，即斑驳型、均匀型黄化和花叶型。黄龙病病树经过2-3年的病情发展，全树发黄，树势迅速衰退，叶片早脱落，枝梢干枯，根系腐烂，病株逐渐枯死。植株一旦感病，轻者影响产量和品质，重者则造成“树死园毁”的悲惨景象，给广大橘农带来不可估量的损失。目前，柑橘黄龙病综合防控措施主要有：繁育和种植柑橘无病毒苗木、防除柑橘木虱、清除病树及加强植物检疫等，虽然严格执行上述措施可有效防控柑橘黄龙病，但在实际生产中存在一定的操作执行难度。通过快速鉴定对黄龙病具有抗性或耐性的柑橘种质材料的方法，筛选出对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的柑橘种质材料或新品系，并在生产上推广应用，是解决柑橘黄龙病危害最有效的途径，对柑橘产业健康可持续发展有着十分重要的意义。

目前，对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的柑橘种质材料的鉴定方法通常是：将待鉴定的种质材料嫁接到砧木上培育8个月以上，长成幼苗，然后在幼苗上嫁接感染黄龙病的芽、皮或者枝段，使黄龙病菌传染到待鉴定的种质材料上，通过苗木上枝、叶黄龙病典型症状的表现及生长情况判断种质材料对柑橘黄龙病的抗性或耐性，整个过程需要14个月以上。上述方法的主要缺点是：每份待鉴定材料只能通过嫁接来接种病原，嫁接材料由于体积小，含有的病原数量较少，使得接种病原数量少，此外由于鉴定周期通常在14个月以上，时间长、效率低。

鉴于此，有必要提供一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，以解决现有技术的不足。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法。本发明将待鉴定的种质材料直接高接在柑橘黄龙病树上，高接成活后通过黄龙病症状观察，并结合黄龙病病菌定量PCR检测。每份待鉴定的种质材料直接嫁接在柑橘黄龙病树上，病原可以持续侵染待鉴定的种质材料，所以接种病原数量多；鉴定周期在6个月以内，具有通量大、时间短、效率高、结果准确等优点。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种对柑橘黄龙病具有抗性或耐性的种质材料的快速鉴定方法，包括如下步骤：

步骤1：收集待鉴定的种质材料；

步骤2：选取对步骤1待鉴定的种质材料具有嫁接亲和力且感染黄龙病菌的柑橘树，作为高接树；

步骤3：高接

春接时间为2-4月，高接方式为单芽切接，具体为：在步骤2选取的高接树上，选取直径0.5cm以上的枝条,在树皮平滑处剪断，在枝条断面下方，沿皮层与木质部交界处向下纵切一刀，露出形成层，切面短于接穗芽，然后从步骤1待鉴定的种质材料的枝条上切取单芽,并插入中间砧枝条切口上，对准双方形成层并缚紧；