[发明专利]用于诱导东方梨离体叶片再生不定梢的培养基、方法和及其应用

说明书

一种用于诱导东方梨离体叶片再生不定梢的培养基、方法和及其应用，包含有具有MS、BA、TDZ、IBA和蔗糖的继代增殖培养基和具有NN69、BA、NAA和山梨糖醇或NN69、TDZ、IBA和蔗糖或NN69、TDZ、IBA和山梨糖醇的不定梢诱导培养基，通过继代增殖培养基和不定梢诱导培养基，实现了东方梨栖霞大香水梨的离体叶片再生不定梢，因此，建立了东方梨离体叶片不定梢再生技术体系，为体细胞诱变多倍体育种和外源基因转化改良品种提供了实施例。

技术领域

本发明涉及一种培养基、方法和及其应用，尤其是一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养基、方法和及其应用。

背景技术

现代植物育种技术如诱变育种、细胞工程育种和基因工程育种等现代生物技术育种方法的发展和应用，离不开植物组织培养和离体叶片培养的成功，离体叶片再生不定芽（梢）技术是在细胞水平进行诱变育种、体细胞变异筛选、嵌合体分离的基础，也是在分子水平上进行外源基因遗传转化操作的基础。因此植物叶片的离体培养是具有重要实用价值的高新技术，在植物的种质创新、新品种选育等方面得到了广泛应用，

植物叶片培养已在很多物种上获得了再生不定芽（梢）的成功，但由于不同物种基因型及遗传背景的复杂性，研究者们还不能实现对所有植物种的叶片培养再生。不同种和不同品种离体叶片的再生难易及再生所需的培养基条件存在较大差异，多年生木本果树的一些品种其离体叶片再生非常困难。现有在梨树上，离体叶片培养研究多在西洋梨品种和几个砧木上有不定梢再生成功的实例，关于栖霞大香水梨包括白梨、砂梨、秋子梨的离体叶片不定梢再生研究仅在砂梨品种上有成功实例，关于白梨叶片不定梢再生研究尚未成功实例，而白梨是栽培最广、品质最优的一个种，这个种内有很多名特优品种，如莱阳慈梨、栖霞大香水梨等，

本发明旨在研究影响栖霞大香水梨白梨离体叶片不定梢再生的因素，建立白梨离体叶片不定梢再生技术体系，为体细胞诱变多倍体育种和外源基因转化改良品种奠定基础。

发明内容

本发明的客体是一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养基，

本发明的客体是一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养方法，

本发明的客体是一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养基和方法的应用。

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养基、方法和及其应用，因此建立了白梨离体叶片不定梢再生技术体系，为体细胞诱变多倍体育种和外源基因转化改良品种提供了实施例。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：一种用于诱导栖霞大香水梨离体叶片再生不定梢的培养基，包含有具有MS 、 BA 、TDZ 、 IBA和蔗糖的继代增殖培养基和具有NN69、BA、NAA和山梨糖醇或NN69、TDZ、IBA和蔗糖或NN69、TDZ、IBA和山梨糖醇的不定梢诱导培养基。

由于设计了继代增殖培养基和不定梢诱导培养基，通过继代增殖培养基和不定梢诱导培养基，实现了栖霞大香水梨的离体叶片再生不定梢，因此，建立了白梨离体叶片不定梢再生技术体系，为体细胞诱变多倍体育种和外源基因转化改良品种提供了实施例。

本发明设计了，还包含有试管苗建立培养基和生根培养基。

本发明设计了，试管苗建立培养基设置为1/2MS + 0.5-2 mg/L BA + 0.1-0.5mg/L IBA + 30 g/L蔗糖，

继代增殖培养基设置为MS + 0.5-1.0 mg/L BA + 0.01-0.1 mg/L TDZ + 0.01-0.5 mg/L IBA + 30 g/L蔗糖，