[发明专利]一种用于PCR扩增的水稻胚芽米DNA模板获得方法及PCR方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于PCR扩增的水稻胚芽米DNA模板获得方法及PCR方法，本发明应用碱处理水稻糙米直接作为PCR反应模板，其目的在于创立一种快速、有效、简便地进行植物DNA扩增的新方法，该方法是将水稻稻米样品去皮，于37℃光照下培养24个小时至露白，得到胚芽米，待用；取S1制得的胚芽米投入试剂A中，于95‑100℃下煮6‑10min，再加入等量的试剂B，搅拌均匀，获得胚芽米DNA模板，利用SSR标准引物，以所述DNA模板进行PCR扩增。本发明在进行种性验证及辅助田间育种时，具有时效性强、提取步骤简单、化学试剂较少、气味小以及环保的技术效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于PCR扩增的水稻胚芽米DNA模板获得方法及PCR方法。

背景技术

自从1980年Batstein等首次描述限制性片段多态性分析(RFLP)作为一种DNA分子标记后，随着分子生物学技术的发展，产生了多种基于PCR的分子标记技术，这些标记技术的第一步即需提取待测样品的基因组DNA。人们经常需要提取高质量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组Sourthern分析、酶切、克隆和测序等分子生物学实验。根据植物的研究对象、研究目的和研究成本等不同,提取基因组DNA所应用的方法也不同。其中，随着作物分子辅助育种的广泛应用与推广，基因型鉴定是最主要的工作，基因组DNA的提取则是最繁重、最耗时的工作之一。目前以水稻种子为研究材料获取DNA的途径有2种：一种是把种子在恒温箱中发苗后，转换为用叶片的方法提取DNA；另一种是直接用水稻种子提取DNA，需要研磨、离心等繁多的步骤。提取水稻DNA的方法有5种：1)CTAB提取法。此方法多用于禾本科植物基因组DNA的提取，是1987年Doyle最先应用；2)试剂盒提取法。此方法主要应用于提取的DNA高质量；3)SDS提取法。此方法适用于多种植物DNA的提取。4)尿素提取法。此方法适用于一般植物和真核微生物DNA的提取，1990年Dudler最先应用此方法。5)叶片碱煮法。这个方法的对象是水稻，叶片直接碱煮后用作模板。这几种方法的优缺点如下表：

除碱煮法以外其他方法均用到研钵、液氮、离心机等，提取步骤繁杂、配制化学试剂种类众多、提取过程刺激味大，操作步骤多。碱煮法虽然很高效、步骤少，但是种子必须要经过5-7天发苗之后才可以开展实验，进行种性验证及辅助田间育种时，检测样品量更多，就显得时效性差。

发明内容

本发明创造性地应用碱处理水稻糙米直接作为PCR反应模板，其目的在于创立一种快速、有效、简便地进行水稻DNA扩增的新方法。

本发明的第一个目的是提供一种用于PCR扩增水稻胚芽米DNA模板获得方法，包括如下步骤：

S1、材料处理

将水稻稻米样品去皮，于37℃光照下培养24个小时至露白，得到胚芽米，待用；

S2、试剂准备

试剂A：浓度3.5-4.5g/L的NaOH溶液；

每500mL的试剂B配方如下：1mol/L pH8.0Tris-HCl5ml，0.5mol/L EDTA1ml，0.5mol/L HCl 100ml，加入蒸馏水定容至500ml；

S3、胚芽米DNA模板的制备

取S1制得的胚芽米投入试剂A中，于95-100℃下煮6-10min，再加入等量的试剂B，搅拌均匀，获得胚芽米DNA模板。

本发明的第二个目的是提供一种利用上述水稻胚芽米DNA模板进行PCR的方法，利用SSR标准引物，以权利要求1中S3得到的DNA模板进行PCR扩增。