[发明专利]一种用于PCR扩增的水稻胚芽米DNA模板获得方法及PCR方法在审
| 申请号: | 201910305392.5 | 申请日: | 2019-04-16 |
| 公开(公告)号: | CN109897886A | 公开(公告)日: | 2019-06-18 |
| 发明(设计)人: | 汪秀峰;倪金龙;许学;马卉;王钰;焦小雨;叶洋洋;鲍翔宇;林玲;左泽平 | 申请(专利权)人: | 安徽省农业科学院水稻研究所 |
| 主分类号: | C12Q1/6806 | 分类号: | C12Q1/6806 |
| 代理公司: | 西安铭泽知识产权代理事务所(普通合伙) 61223 | 代理人: | 俞晓明 |
| 地址: | 230001 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 胚芽米 水稻 生物技术领域 糙米 标准引物 化学试剂 技术效果 水稻稻米 田间育种 植物DNA 碱处理 时效性 等量 扩增 露白 去皮 光照 验证 环保 应用 | ||
1.一种用于PCR扩增的水稻胚芽米DNA模板获得方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、材料处理
将水稻稻米样品去皮,于37℃光照下培养至露白,得到胚芽米,待用;
S2、试剂准备
试剂A:浓度3.5-4.5g/L的NaOH溶液;
试剂B,且每500mL的试剂B配方如下:1mol/L pH8.0Tris-HCl5ml,0.5mol/L EDTA 1ml,0.5mol/L HCl 100ml,加入蒸馏水定容至500ml;
S3、胚芽米DNA模板的制备
取S1制得的胚芽米投入试剂A中,于95-100℃下煮6-10min,再加入等量的试剂B,搅拌均匀,获得胚芽米DNA模板。
2.一种利用权利要求1所述水稻胚芽米DNA模板进行PCR的方法,其特征在于,
利用SSR标准引物,以所述胚芽米DNA模板进行PCR扩增。
3.根据权利要求2所述的用水稻胚芽米DNA模板进行PCR的方法,其特征在于,PCR反应体系为:1×PCR缓冲液,2.5mmol/L Mg2+,0.25mmol/L dNTPs,0.2μmol/L正、反向引物,1.0UTaq DNA聚合酶,20ng-40ngDNA模板,总体积10μL;反应程序为:95℃5min,94℃30s、55℃30s、72℃40s、循环35次,72℃5min,得到扩增产物,12℃保存。
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