[发明专利]一种表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的融合蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了一种表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的融合蛋白及其制备方法。其中编码融合表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；融合表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明首次融合表达了狂犬病病毒G蛋白与Fc片段。本发明利用杆状病毒表达系统构建的重组杆状病毒对外源蛋白表达稳定，而且其效价稳定。该融蛋白因融合了Fc片段，能利跨越粘膜屏障，转运到粘膜固有层，被抗原递呈细胞摄取后，再递呈给T细胞，引起机体的适应性免疫，这将为狂犬病口服疫苗的研究和制备提供一个新的策略，在狂犬病的防治方面具有广阔的研究前景。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，更具体地，涉及一种表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的融合蛋白及其制备方法。

背景技术

狂犬病作为一种重大的人畜共患病，遍及世界大部分地区，全世界一半以上人口居住的国家都有狂犬病流行，一旦出现临床症状，致死率几乎100％。它是由弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)中一种具有囊膜的狂犬病病毒(RABV)引起的致死性、高度嗜神经性人兽共患烈性传染病。

99％的人狂犬病感染都来自病犬，狂犬病通过感染家畜和野生动物经咬伤或抓伤(通常经由唾液)传播至人。全球每年约有60,000的人死于狂犬病，特别是在非洲和亚洲地区，在美洲蝙蝠是主要的感染来源。最近几年，在澳大利亚和西欧也有从蝙蝠传播给人的报道。此外，狐狸、浣熊、臭鼬、豺狼、猫鼬和其他食肉动物也能传播狂犬病，但几率较低。因此控制犬的狂犬病，特别是对流浪犬只的管理，是预防人间狂犬病的关键所在。

据WHO报道，犬免疫接种率达到70％就足以控制犬间传播的狂犬病。但是《中国狂犬病防治现状》中的数据表明，全国约有犬7500万，其中农村地区散养的犬、猫占90％～95％，极易发生动物间疫病传播及动物伤亡情况。此外，调查表明，我国农村地区犬和猫免疫率极低不足以形成免疫屏障，而且，我国狂犬病病例多未进行暴露后处理或处理不规范。因此，面对这种极为严峻的形势，唯一简便有效的方法就是研制口服疫苗建立免疫群，达到消除狂犬病的目的。但是，造成我们狂犬病免疫不足的一个很重要的原因是目前狂犬病的免疫方法是目前针对狂犬病的免疫方式是注射免疫，注射疫苗要严格遵循动物医生制定的免疫时间表，定期去专业机构进行注射。因此目前缺乏一种更简便的免疫方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的融合蛋白及其制备方法。

本发明的第一个目是提供一种编码融合表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的基因。

本发明的第二个目是提供一种融合表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的蛋白。

本发明的第三个目是提供一种重组载体。

本发明的第四个目是提供一种重组杆状病毒。

本发明的第五个目是提供一种重组细胞。

本发明的第六个目是提供所述蛋白的制备方法。

本发明的第七个目是提供权所述基因、所述蛋白、所述重组载体、所述重组杆状病毒、或所述重组细胞中的一种或几种在制备狂犬病疫苗中的应用。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明将能刺激机体产生中和抗体的狂犬病病毒G蛋白与IgG2a Fc通过杆状病毒Bac To Bac真核表达系统融合表达的制备方法，以期给狂犬病病毒口服疫苗提供研究基础。

RABV编码5种结构蛋白质，分别是核蛋白(N)，磷蛋白(P)，基质蛋白(M)，跨膜糖蛋白(G)，病毒聚合酶蛋白(L)。G蛋白是唯一刺激机体产生中和抗体的表面抗原，同时也能诱导T细胞，刺激机体产生细胞免疫产生中和抗体，中和抗体能在中枢神经系统(CNS)中清除狂犬病病毒。