[发明专利]一种玉米赤霉烯酮降解酶及其应用

权利要求书

1.一种玉米赤霉烯酮降解酶在玉米赤霉烯酮降解中的应用，其特征在于，所述玉米赤霉烯酮降解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，编码所述玉米赤霉烯酮降解酶的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

(1)构建包含玉米赤霉烯酮降解酶基因的重组菌；

(2)诱导表达重组菌，获得重组表达的玉米赤霉烯酮降解酶粗酶液；

(3)纯化粗酶液，获得纯酶液；

(4)将纯酶液和含玉米赤霉烯酮溶液混合，进行降解反应；反应条件为30～40℃，pH 5～10，10～20min。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，重组菌构建方式为：PCR扩增玉米赤霉烯酮降解酶基因，获得PCR产物；用NdeI和XhoI分别双酶切PCR产物和pET-30a(+)载体，将酶切后的PCR产物纯化，并用T4DNA连接酶连接到pET-30a(+)载体中，获得重组载体pET-30a(+)-LD08，将重组载体转入感受态大肠杆菌E.coLiBL21(DE3)中，涂布于固体LB培养基上培养，挑取单菌落，接种于含硫酸卡那霉素的LB液体培养基中，筛选阳性转化子，即为重组菌。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述步骤(2)中，粗酶液诱导表达方法为：用含硫酸卡那霉素的LB培养基培养重组菌，OD600值达到0.6后，添加IPTG继续培养后，将液体培养物离心，弃上清，得到重组菌沉淀物；使用磷酸盐缓冲液重新悬浮菌体，超声波细胞破碎仪对细胞进行破碎，离心，除去细胞残渣，收集上清液，即为重组表达的粗酶液。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中，将粗酶液置于冰上，根据表达出的重组酶含有His-tag标签，利用Ni柱进行亲和层析纯化，缓冲液洗脱收集目的蛋白，以获得纯化的酶液。