[发明专利]一种量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法及试纸条的制备方法在审
| 申请号: | 201910292989.0 | 申请日: | 2019-04-12 |
| 公开(公告)号: | CN110082521A | 公开(公告)日: | 2019-08-02 |
| 发明(设计)人: | 胡延祯;李超 | 申请(专利权)人: | 西安交通大学苏州研究院 |
| 主分类号: | G01N33/532 | 分类号: | G01N33/532 |
| 代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 周敏 |
| 地址: | 215123 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 肌酸激酶同工酶 量子点 制备 碳化二亚胺盐酸盐 羟基琥珀酰亚胺 投料摩尔比 二甲基胺 抗体免疫 复合物 硫代物 试纸条 丙基 抗体 乙基 检测灵敏度 标准曲线 准确定量 抗原 偶联 检测 | ||
1.一种量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)、使量子点与1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺或其硫代物进行反应,控制所述的量子点、所述的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐、所述的N-羟基琥珀酰亚胺或其硫代物的投料摩尔比为1:4000~10000:5000~10000;
(2)、调整步骤(1)处理后的反应液的pH为6~8;
(3)、向步骤(2)处理后的反应液中加入肌酸激酶同工酶MB抗体制得所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物,控制所述的量子点和所述的肌酸激酶同工酶MB抗体的投料摩尔比为1:10~18。
2.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,所述的量子点的平均粒径为10~30nm,发射波长范围为560nm~650nm。
3.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,所述的量子点、所述的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐、所述的N-羟基琥珀酰亚胺或其硫代物的投料摩尔比为1:4000~6000:8000~10000。
4.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)的反应条件为冰浴超声,反应时间为20~40min。
5.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(1)反应完成后,采用超滤法除去过量的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺或其硫代物,然后通过添加pH为6~8的硼酸缓冲液调整反应液的pH。
6.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,所述的量子点和所述的肌酸激酶同工酶MB抗体的投料摩尔比为1:13~16。
7.根据权利要求1所述的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物的制备方法,其特征在于:步骤(3)的反应条件为冰浴超声,反应时间为2~5h。
8.一种试纸条的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
(1)采用处理液处理样品垫和结合垫;
(2)采用如权利要求1至7中任一项所述的制备方法制得的量子点-肌酸激酶同工酶MB抗体免疫复合物处理步骤(1)处理后的结合垫;
(3)采用肌酸激酶同工酶MB抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体在硝酸纤维素膜上包被检测线和质控线,然后使用封闭液封闭包被后的硝酸纤维素膜;
(4)将步骤(1)处理后的样品垫,步骤(2)处理后的结合垫,步骤(3)处理后的硝酸纤维素膜、吸水垫和载体依次层叠,制成所述的试纸条。
9.根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)中,以质量分数计,所述的处理液为含有1~5%的牛血清白蛋白、1~3%的吐温20、0.5~1.5%的NaCl、1~5%的蔗糖和1~3%的聚乙二醇2000的pH为7~9的硼酸缓冲液;步骤(3)中,以质量分数计,所述的封闭液为含有质量分数为0.5~2%的牛血清白蛋白的pH值为7~9的硼酸缓冲溶液。
10. 根据权利要求8所述的制备方法,其特征在于:步骤(3)中,采用浓度为0.5~2mg/ml的肌酸激酶同工酶MB抗体溶液以0.5~1μl/cm的划线速度在所述的硝酸纤维素膜上制得检测线,采用浓度为0.5~1 mg/ml的羊抗鼠IgG多克隆抗体溶液以0.5~1μl/cm的划线速度在硝酸纤维素膜上制得质控线。
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