[发明专利]用于检测转基因植物的探针、探针组、表面等离子共振生物传感器及检测转基因植物的方法

说明书

本公开涉及一种用于检测转基因植物的探针、探针组、表面等离子共振生物传感器及检测转基因植物的方法。所述探针的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。本公开的探针及含有该探针的表面等离子共振生物传感器能够特异性地检测NOS终止子，检测灵敏度高且可再生，便于使用。采用该探针及含有该探针的表面等离子共振生物传感器能够灵敏高效特异性地检测含有NOS终止子的转基因植物。本公开的方法克服了传统转基因检测PCR方法耗时长、费用高且不可重复再生检测的缺点，具有灵敏度高、重复性及稳定性好的优点。整个样品分析过程中芯片表面探针活性和结构不受影响，因此可实现传感器的重复利用。

技术领域

本公开涉及生物技术产品分析测试领域，具体涉及一种用于检测转基因植物的探针、表面等离子共振生物传感器及检测转基因植物的方法。

背景技术

目前，用于转基因植物及其加工产品检测的方法主要有两种，一种基于核酸的检测，一种基于蛋白质的免疫学检测。其中，以针对核酸检测的PCR技术在转基因产品成分检测中应用最广泛。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。普通定性PCR在体外扩增特异性片段后，需结合利用电泳技术对产物进行定性分析；实时荧光定量PCR是通过对每一个循环获得的片段上的荧光信号进行实时检测，从而实现对起始模板中特异性片段的定性及定量分析。

但传统的PCR检测方法仪器价格昂贵，耗时较长，且为“终点法”，即每一个反应中所使用的试剂、耗材在实验结束后均不可重复使用，且整个反应过程中不能实现实时监控。

表面等离子体共振(SPR)技术可看做是一种物理光学现象，当入射光以临界角入射到两种不同透明介质界面时将发生全反射，若在介质表面镀上一层金属银或金的薄膜后，此时入射光可引起金属自由电子的共振，电子吸收光能量后导致反射光在一定角度内大大减小，而其中使反射光完全消失的入射光角度称为共振角(SPR角)。SPR角随金属表面流过的液相折射率变化而变化，这一变化又和结合在金属表面的物质的相对分子质量成正比，因此可以通过监测SPR角的动态变化来进行各方面的检测。

发明内容

本公开的目的是提供一种探针及既能提高检测灵敏度又可再生的生物传感器。

为了实现上述目的，本公开第一方面提供一种用于检测转基因植物的探针，所述探针的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示的序列。

本公开第二方面提供一种用于检测转基因植物的探针组，包括检测探针和内标探针，所述检测探针为权利要求1所述的探针，所述内标探针的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示的序列。

本公开第三方面提供一种用于检测转基因植物的表面等离子共振生物传感器，所述表面等离子共振生物传感器包括传感芯片，所述传感芯片上偶联有本公开第一方面所述的探针和/或本公开第二方面所述的探针组。

可选地，所述传感芯片表面结合有链霉亲和素；所述探针的5’端标记有生物素。

可选地，所述偶联包括如下步骤：将含有所述探针的偶联溶液流经所述芯片，使所述探针与所述芯片表面结合，得到所述表面等离子共振生物传感器；或者，将含有所述检测探针的检测探针偶联溶液和含有所述内标探针偶联溶液分别流经所述芯片的表面，使所述检测探针和所述内标探针分别与所述芯片表面结合，得到所述表面等离子共振生物传感器。

可选地，所述偶联溶液还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20，所述探针在所述偶联溶液中的浓度为20～50nM，所述探针的偶联量为200～400RU；或者，所述检测探针偶联溶液和所述内标探针偶联溶液各自独立地还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20；所述检测探针在所述检测探针偶联溶液中的浓度为20～50nM；所述内标探针在所述内标探针偶联溶液中的浓度为20～50nM；所述检测探针的偶联量为200～400RU，所述内标探针的偶联量为200～400RU；其中，所述偶联的时间为180～500s。