[发明专利]用于检测转基因植物的探针、探针组、表面等离子共振生物传感器及检测转基因植物的方法在审
| 申请号: | 201910290712.4 | 申请日: | 2019-04-11 |
| 公开(公告)号: | CN110093440A | 公开(公告)日: | 2019-08-06 |
| 发明(设计)人: | 李亮;金芜军;安娜;宛煜嵩;刘卫晓;郑子繁 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院生物技术研究所 |
| 主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12Q1/6837;C12Q1/6825;C12N15/11 |
| 代理公司: | 北京英创嘉友知识产权代理事务所(普通合伙) 11447 | 代理人: | 周建秋 |
| 地址: | 100081 北*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 探针 转基因植物 表面等离子共振生物传感器 检测 探针组 检测灵敏度 转基因检测 再生 表面探针 核苷酸序 样品分析 重复利用 灵敏度 中芯片 传感器 耗时 灵敏 重复 | ||
1.一种用于检测转基因植物的探针,其特征在于,所述探针的核苷酸序列为SEQ IDNO:1所示的序列。
2.一种用于检测转基因植物的探针组,其特征在于,包括检测探针和内标探针,所述检测探针为权利要求1所述的探针,所述内标探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的序列。
3.一种用于检测转基因植物的表面等离子共振生物传感器,其特征在于,所述表面等离子共振生物传感器包括传感芯片,所述传感芯片上偶联有权利要求1所述的探针和/或权利要求2所述的探针组。
4.根据权利要求3所述的传感器,其中,所述传感芯片表面结合有链霉亲和素;所述探针的5’端标记有生物素。
5.根据权利要求3所述的传感器,其中,所述偶联包括如下步骤:将含有所述探针的偶联溶液流经所述芯片,使所述探针与所述芯片表面结合,得到所述表面等离子共振生物传感器;或者,
将含有所述检测探针的检测探针偶联溶液和含有所述内标探针的内标探针偶联溶液分别流经所述芯片的表面,使所述检测探针和所述内标探针分别与所述芯片表面结合,得到所述表面等离子共振生物传感器。
6.根据权利要求3或5所述的传感器,其中,所述偶联溶液还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20,所述探针在所述偶联溶液中的浓度为20~50nM,所述探针的偶联量为200~400 RU;或者,
所述检测探针偶联溶液和所述内标探针偶联溶液各自独立地还含有HEPES、NaCl、EDTA和Surfactant P20;所述检测探针在所述检测探针偶联溶液中的浓度为20~50nM;所述内标探针在所述内标探针偶联溶液中的浓度为20~50nM;所述检测探针的偶联量为200~400RU,所述内标探针的偶联量为200~400 RU;
其中,所述偶联的时间为180~500s。
7.一种检测转基因植物的方法,其特征在于,所述检测的目标基因为NOS终止子,该方法包括如下步骤:
S1,提取待测植物的基因组DNA;
S2,使含有所述基因组DNA的待测溶液流经所述传感芯片,并检测RU值响应信号;若产生RU值响应信号,则所述待测植物中含有所述目标基因,若未产生RU值响应信号,则所述待测植物中不含有所述目标基因;所述传感芯片为权利要求3~6中任意一项所述的传感器的传感芯片。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,步骤S2中的所述待测溶液流经所述传感芯片的流速为10~30μL/min,时间为180~600s;所述待测溶液还含有浓度为10~13mM的HEPES、浓度为130~150mM的NaCl、浓度为3~5mM的EDTA和浓度为0.05~0.1体积%的Surfactant P20,所述待测溶液的pH为7.4~8.0。
9.根据权利要求7所述的方法,其中,该方法还包括在步骤S2之后,将所述传感芯片再生,所述再生的方法包括:使再生试剂与所述传感芯片接触30s~60s进行再生处理;所述再生试剂为PH值为1.5~3.0的甘氨酸-HCl溶液和/或浓度为10~50mM的NaOH溶液。
10.根据权利要求7所述的方法,其中,所述待测植物包括水稻。
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