[发明专利]一种食品中绵羊源成分快速检测方法及试剂盒

说明书

本发明提供一种食品中绵羊源成分快速检测试剂盒，涉及生物物种鉴定技术领域。本发明首先筛选出一个绵羊源通用内标准基因Calponin，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其在绵羊物种中拷贝数恒定，不存在等位基因变异，可作为鉴定绵羊源的靶基因。以该基因为靶序列设计了LAMP扩增引物，与LAMP反应液一起进行恒温扩增，LAMP反应产物用于胶体金核酸试纸条检测。LAMP反应结合胶体金核酸试纸条检测构成快速检测试剂盒，可快速、灵敏地检测食品中的绵羊源成分，检测灵敏度可达0.16％(w/w)。本发明试剂盒使用方法简单、成本低廉，反应结果易于观察，特异性好，非常适用于现场实时检测。

技术领域

本发明涉及生物物种鉴定技术领域，具体的说涉及一种检测食品中绵羊源成分的环介导等温扩增技术(LAMP)结合胶体金核酸试纸条检测的快速检测试剂盒。

背景技术

随着经济的高速发展，人民生活水平的提高，我国居民对肉类食品的需求逐年增加。尽管许多国家明确规定要求食品标签真实明确地标出肉的种类、来源，禁止掺假行为，但是市场上仍有很多肉类掺假的事件发生，例如为了降低成本，驴肉火烧中掺入了猪肉，羊肉中掺入牛肉或猪肉，香肠中掺杂其他肉类等等行为。目前，对于食品掺假的检测方法主要是PCR方法。PCR方法需要依靠特殊仪器，且最终结果的判断需要琼脂糖凝胶电泳完成，整个过程耗时较长。因此，本发明目的是提供一种食品中绵羊源成分的快速灵敏检测试剂盒。

目前，内标准基因已被广泛地用于鉴别食品掺假，但如何筛选出合适的内标准基因显得尤为重要。目前国内外的肉制品掺假检测技术多是针对线粒体上的基因设计特异引物来进行实时荧光定量PCR扩增，由于线粒体基因为多拷贝基因，其检测灵敏度高，但同时在区分由于销售、运输等过程所产生的无意识交叉污染与有意识的非法添加时存在困扰。另外，高拷贝数线粒体DNA的浓度无法和基因组DNA的浓度相对应，因此无法对样品进行精确定量分析，同时由于线粒体基因同源性极高，难以通过普通PCR实现定性检测。因此，该方法只能借助荧光定量PCR实现肉类掺假的筛选鉴别。若要鉴别低浓度的无意交叉污染和有意非法添加并明确掺假比例实现快速筛查，则要选择染色体上的低拷贝基因作为肉类内标准基因。

环介导等温核酸扩增技术(loop-mediated isotherm amplification,LAMP)是由Notomi于2000年开发的一种新型的恒温核酸扩增方法，其原理是利用一种链置换DNA聚合酶(BstDNA polymerase)和两对特殊的引物,特异地识别靶序列上的6个独立区域，在等温条件下(65℃左右)保温几十分钟，即可完成核酸扩增反应。

胶体金核酸试纸条是依靠抗原与抗体的特异性结合，因此其具有极高的灵敏度。本发明将LAMP技术同胶体金核酸试纸条检测结合起来，提供一种食品中绵羊源成分的快速灵敏检测试剂盒。本发明无需复杂的仪器，时间短，操作简单，灵敏度高，完全可以满足现场检测的需求。

发明内容

本发明的目的是提供用于检测食品中绵羊源成分的绵羊源通用内标准基因。

本发明另一目的在于提供一种具有高灵敏度、高特异性、操作简单的检测食品中绵羊源成分的LAMP结合胶体金核酸试纸条检测的快速检测试剂盒。

一种用于检测食品中绵羊源成分的基因，其为内标准基因Calponin，具有SEQ IDNO.1所示的序列。

本发明提供了上述内标准基因Calponin在检测绵羊源成分中的应用。

本发明提供了上述内标准基因Calponin在食品中绵羊源成分鉴定中的应用。

本发明提供了一种用于检测上述内标准基因Calponin的特异性LAMP引物组合，包括以下4条引物：

F3：5’-CTCACTCCTCTGACAGTCCT-3’(SEQ ID NO.2)；