[发明专利]一种食品中绵羊源成分快速检测方法及试剂盒有效
| 申请号: | 201910289658.1 | 申请日: | 2019-04-11 |
| 公开(公告)号: | CN109811066B | 公开(公告)日: | 2020-11-24 |
| 发明(设计)人: | 许文涛;罗云波;黄昆仑;张超;杜再慧;马玉婷 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
| 主分类号: | C12Q1/6888 | 分类号: | C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12Q1/6804;C12N15/11 |
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| 地址: | 100083 北京市海淀*** | 国省代码: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 一种 食品 绵羊 成分 快速 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种检测食品中绵羊源成分的快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)待测样品提取DNA;
(2)以提取DNA为模板,采用特异性LAMP引物组合进行LAMP检测;
(3)结果判断:采用胶体金核酸试纸条进行结果判断,检测T线和质控C线均有红色条带,含有目的基因;质控C线有红色条带,而检测T线无条带,不含有目的基因;
所述用于检测食品中绵羊源成分的基因,其为内标准基因,具有SEQ ID NO.1所示的序列;
所述特异性LAMP引物组合,包括以下4条引物:
F3: 5’- CTCACTCCTCTGACAGTCCT-3’; B3: 5’- CCTGGGGCAACAGAATGG-3’; FIP: 5’-GCTAACCTCCAGGCCTCAGTTTGGTGGGTACTGTTACCGTCA-3’; BIP: 5’-AGCTGAACCCTGGAAATCAGGCACTGAGGCTCAGAGAAGGT-3’;
所述的方法,其特征在于,步骤(3)所述的胶体金核酸试纸条包含胶体金核酸试纸条测试线与质控线,测试线标记有Cy5抗体,质控线标记有生物素二抗,结合垫有胶体金-生物素抗体标记物。
2.权利要求1中所述的特异性LAMP引物组合在绵羊源成分鉴定中的应用。
3.权利要求1中所述的特异性LAMP引物组合在制备绵羊源成分检测试剂盒或检测试剂中的应用。
4.权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(2)所述LAMP检测,其25 μL LAMP检测体系的具体配置为:1x Thermopol buffer,0.4 mM dNTP,3 mM MgSO4,1.0 M 甜菜碱,1.6μM 引物FIP,1.6μM 引物BIP,0.2μM引物F3,0.2μM引物B3,8 U Bst DNA聚合酶大片段。
5.权利要求1所述的方法,其特征在于,LAMP检测反应条件为:60-65℃恒温20min,85℃5min,然后终止反应。
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