[发明专利]玛咖中生物碱成分的快速鉴定方法

说明书

本发明属于分析检测领域，公开了一种玛咖中生物碱成分的快速鉴定方法，并用该方法建立了玛咖中生物碱成分的质谱数据库，在此基础上采用离子阱飞行时间串联质谱通过精确质量数的检索匹配对玛咖中生物碱成分实现快速筛查，并使用多级特征碎片离子进行确证，根据碎片离子，推导出裂解途径。该方法高效准备，应用于某品牌的玛咖粉，从中发现并确认该玛咖粉中含有咪唑生物碱Lepidiline A。

技术领域

本发明属于检测分析技术领域，具有涉及一种玛咖中生物碱成分的快速鉴定方法。

背景技术

玛咖(Lepidium meyenii Walp)(Maca)为十字花科独行菜属一年生或两年生草本植物，原产海拔3500-4500m低温、强风、生态条件恶劣的南美安第斯山地区。玛咖中富含植物蛋白、氨基酸、脂肪及微量元素等多种营养成分，其中生物碱是玛咖中较早发现的次生代谢产物，玛咖中的生物碱总含量达到4.65％，也是其主要功效成分之一。据研究表明，现从玛咖中能得到生物碱主要有：玛咖酰胺和玛咖烯、羟基吡啶衍生物类、B一咔啉生物碱、咪唑生物碱。这些生物碱能全面调理人体机能，减少内分泌失调，具有抗氧化、抗肿瘤以及提高动物成熟卵泡小体的数量和精子的质量，从而能显著提高哺乳动物和鱼类的生育力。其营养成分还具有增强人的精力、耐力等功效，因此玛咖又常被人们称为“秘鲁人参”。

目前玛咖种植地广泛，颜色众多，其中不乏以次充好、真伪产品难以区分，严重扰乱市场秩序。玛咖与其他天然植物一样成分复杂，且研究玛咖时缺乏活性成分对照品，亟待建立高效准确的鉴定方法。

目前国内外对玛咖中生物碱的检测研究报道不多，常见的生物碱含量的测定方法有酸碱滴定法、分光光度法、比色法等，酸性染料比色法近年来在我国应用较多，主要侧重于玛咖中总生物碱的含量，对缺乏活性成分对照品的生物碱成分暂无法鉴别。

离子阱飞行时间串联质谱(LCMS-IT-TOF)由于既具备高分辨率和高质量数准确度，又具备多级质谱功能(最多到10级)，能提供未知化合物的结构信息。通过精确质量数的检索匹配及多级特征碎片离子确证，从而推导出化学物结构，可以快速且方便地对未知化合物实现快速鉴别。本文通过收集多种玛咖样品，并通过优化的前处理方法对玛咖样品进行处理后，采用离子阱飞行时间串联质谱进行分析，再将数据导入Formula predict软件、MetaID软件和ACD LABS 12.0MS Manager软件进行分析，通过精确质量数的检索匹配和多级特征碎片离子进行确证，根据碎片离子，推导出裂解途径，对玛咖中生物碱成分实现快速鉴定。然后将所建立的方法应用于某品牌的玛咖粉，从中发现并确认含有与所建立的质谱数据匹配的多种生物碱。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明旨在建立一种玛咖中生物碱成分的快速鉴定方法。

本发明的技术方案是，玛咖中生物碱成分的快速鉴定方法，包括以下步骤：

(1)玛咖前处理，得玛咖前处理液；

(2)对玛咖前处理液进行LC-IT-TOF-MS分析，建立玛咖中生物碱成分的的质谱数据库，如附表1所示；

(3)对待测玛咖样品进行步骤(1)的前处理，然后用步骤(2)的方法进行检测，得到待测玛咖样品的离子流图，将此离子流图与附表1进行匹配，得出待测玛咖样品中生物碱成分。

优选方案，步骤(1)所述玛咖前处理方法包括：称量玛咖粉1g，加20倍量纯水，以80℃水浴提取2h，提取液4000r/min离心15min，收集上清液浓缩至1/4体积浸膏，以10mL2％的盐酸溶解，过滤，残渣用10mL2％的盐酸溶解，合并滤液。用浓氨水调节滤液pH至2-3，等体积氯仿萃取3次。将酸提取液用5mol/LNaOH溶液调节pH至9-10，等体积氯仿萃取3次，合并萃取液，蒸发浓缩至10mL。

优选方案，步骤(2)所述LC-IT-TOF-MS分析的分析条件包括：