[发明专利]用于膀胱癌诊断的尿液微小RNA靶基因数据库比值模型建立方法

说明书

用于膀胱癌诊断的尿液微小RNA靶基因数据库比值模型建立方法，方法步骤为：模型数据信息采集；尿液标本收集及保存；样品中总RNA的制备；第一链cDNA序列的合成；荧光定量PCR检测；miRNA检测结果Ct的比值（Ct _182‑5p/Ct _152‑3p）作为诊断指标。本发明提供的用于膀胱癌早期筛查的尿液微小RNA比值模型、试剂盒可以膀胱癌早期筛查提供更可靠的判断依据，通过miR‑182‑5p和miR‑152‑3p的比值模型的客观指标，与其他肿瘤早期筛查标志物进行综合评价，提高诊断准确率，简化诊断过程，在膀胱癌诊疗中起到重大作用。

技术领域

本发明涉医学技术领域，尤其涉及一种用于用于膀胱癌诊断的尿液微小RNA靶基因数据库比值模型建立方法。

背景技术

膀胱癌是世界上最常见的癌症之一，存活率低且远处转移频繁。通常，膀胱癌的诊断需要侵入式的膀胱镜检查和活组织检查，通常伴有不良反应以及人为的不便。目前用于临床诊断膀胱癌的方法敏感性范围为57-82％至74-88％，随着癌症的阶段和程度的增加，灵敏度也会增加。尿液细胞学作为无创性的标记技术也在广泛使用，但是容易漏检低等级的膀胱癌。随着分子水平的发展对肿瘤发生、发展、治疗相关机制的进一步阐述，迫切需要开发用于BC的初始诊断和监测的新型诊断方法。液体活检来识别泌尿系统恶性肿瘤中的生物标志物近年来研究较多，体液（如血液和尿液）中基于DNA和RNA靶基因数据库的标记物在诊断、预后、预测和监测泌尿系统恶性肿瘤方面是有希望的潜在标志物。因此，无创性，高灵敏度，基于尿液的诊断技术是今后本技术领域研究的重点。

微小RNA（miRNA）是一类具有调控功能的非编码 RNA，编码miRNA的基因可能位于功能基因编码区、非编码区，可能成簇表达或独立表达。这种机体内源性表达的单链小分子RNA，位于基因组非编码区，具有高度保守性，时序性和组织特异性。miRNA广泛存在于各种真核细胞中，不编码任何蛋白质，长度仅为20～24nt。成熟的miRNA 5′端有一个磷酸基团，3′端为羟基，由具有发夹状结构的约70～90nt的单链RNA前体经过Dicer酶加工后形成。成熟的miRNA形成RNA诱导的基因沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC）作用于靶点mRNA，通过对mRNA剪切或抑制其翻译过程而调控基因的表达。miRNA作为生物调控分子，可以充当癌基因或肿瘤抑制因子，在肿瘤中表达异常，这种表达模式使miRNA可以作为肿瘤早期诊断或分期的一种标志物。

近年来，关于miRNA与肿瘤之间的关系研究已有很多报道，已经明确miRNA具有调节肿瘤细胞增殖、凋亡、血管形成、代谢以及耐药等功能。研究显示miRNA在肝癌、结直肠癌、乳腺癌、非细小细胞肺癌等具有临床诊断价值。在膀胱癌患者的尿样中可以发现反映膀胱癌特性的微小RNA。它们可以从多种生物样品中提取，例如血浆，尿液，粪便或活组织检查样品，并且通常是稳定的并且能够抵抗各种储存条件。可以使用高度灵敏和标准化的技术非侵入性地检测miRNA的变化并在体液中定量。miRNA是诊断，预后和临床随访的分子标志物的良好候选者，从膀胱癌患者的尿液中发现和筛选膀胱癌相关的miRNA标志物，建立诊断方法，对早期诊断膀胱癌具有重要的意义和价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种尿液微小RNA比值模型建立方法，通过该方法建立的模型对于膀胱癌的诊断有很高的参考和应用价值。

本发明发现在尿液标本中，根据U6的含量进行标准化每个样本，进一步检测发现相对于正常人群尿液标本，miR-182-5p Ct值在膀胱癌混着尿液标本中表达差异，具有统计学意义。miR-152-3p表达稳定，组间无统计学意义。尿液中miRNA的差异表达情况可以用来作为膀胱癌特殊标志物，能够预测膀胱癌的发生情况，建立一种计量方式，能够对膀胱癌做出诊断。

实现本发明目的的技术方案为：用于膀胱癌诊断的尿液微小RNA靶基因数据库比值模型建立方法，该比值模型的建立方法步骤如下：