[发明专利]快速检测小麦光周期基因Ppd-B1甲基化水平的引物、方法及应用

权利要求书

1.一种快速检测小麦光周期基因Ppd-B1甲基化水平的引物，其特征在于，包括Ppd-B1-HpaII-F1和Ppd-B1-HpaII-R1，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

2.一种快速检测小麦光周期基因Ppd-B1甲基化水平的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、利用CTAB法提取小麦材料基因组DNA；

步骤2、对小麦材料基因组DNA进行酶切处理；

步骤3、对酶切后的产物进行PCR扩增处理；

步骤4、用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物，如获得扩增产物的分子量为586bp的扩增片段，表明鉴定材料为Ppd-B1高甲基化类型，否则表明鉴定材料为Ppd-B1低甲基化类型。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2中的酶切体系如下：10×NEBuffer 2.5μL，BstUI或HpaII 0.5μL，600ng/μL DNA 3.0μL，dd H₂O 19.0μL，总量为25.0μL。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤2中的酶切条件如下：BstUI酶切样品置于60℃，酶切15min；HpaII酶切样品置于37℃，酶切15min。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3中的PCR体系如下：酶切产物1μL，10μM Ppd-B1-HpaII-F1 1μL，10μM Ppd-B1-HpaII-R1 1μL，2×PCR Master mix 12.5μL，dd H₂O 9.5μL，总量为25.0μL。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤3中的PCR反应程序如下：①预变性94℃，5min；②94℃变性，30s；62℃退火，40s；72℃延伸，40s；40个循环；③72℃，延伸10min；④4℃，保存。

7.权利要求1所述的引物、权利要求2-6所述的方法在快速检测小麦光周期基因Ppd-B1甲基化水平中的应用。

8.权利要求1所述的引物、权利要求2-6所述的方法在小麦育种中的应用。