[发明专利]一种获得非转基因耐储存鲜食枸杞的方法

说明书

本发明公开了一种获得非转基因耐储存鲜食枸杞的方法。本发明提供了一种培育耐储存鲜食枸杞的方法，包括如下步骤：抑制目的枸杞中果胶裂解酶基因的表达，从而使枸杞耐储存；或抑制目的枸杞中果胶裂解酶的含量或活性，从而使枸杞耐储存。枸杞鲜果的营养价值显著高于干果，但货架期短是限制鲜果销售的主要原因。本方法相较于传统育种技术能够快速地获得耐储存的新品种。

技术领域

本发明属于生物技术育种领域，涉及一种获得非转基因耐储存鲜食枸杞的方法，特别涉及一种利用基因组编辑技术定点突变宁夏枸杞果胶裂解酶相关基因，获得枸杞耐储存育种材料的方法。

背景技术

枸杞(Lycium barbarumL.)是我国重要的药用植物资源。含枸杞多糖、甜菜碱、枸杞色素等，现代医学证明枸杞具有广泛的药用价值。此外枸杞耐干旱，适宜沙地生长，因此可作为水土保持的灌木，又由于其耐盐碱，成为盐碱地开树先锋。

枸杞鲜果的各种营养成分均比干果高，已经逐渐成为受消费者喜爱的时令果品。鲜食枸杞具备果粒大、皮薄肉厚、籽少味甘。但枸杞鲜果为浆果，水分含量高达80％，且富含糖分，果实采收后变质的速度快，极易霉烂，果实供应期及货架期很短，难以满足市场需求。皮薄肉厚虽改良了口感，却增加了贮藏及运输过程的困难。使得枸杞鲜果的销售成本很高，风险极大。

发明内容

为了获得非转基因耐储存鲜食枸杞，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种培育耐储存鲜食枸杞的方法，包括如下步骤：

抑制目的枸杞中果胶裂解酶基因的表达，从而使枸杞耐储存；

或抑制目的枸杞中果胶裂解酶的含量或活性，从而使枸杞耐储存。

上述方法中，所述果胶裂解酶为如下(a1)或(a2)或(a3)：

(a1)序列表的序列3所示的蛋白质；

(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

(a3)与(a1)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且具有相同功能的蛋白质。

上述方法中，所述果胶裂解酶基因为如下(b1)-(b4)中任一种：

(b1)编码区如序列表的序列1所示的DNA分子；

(b2)编码区如序列表的序列2所示的DNA分子；

(b3)在严格条件下与(b1)或(b2)限定的DNA分子杂交且编码果胶裂解酶的DNA分子；

(b 4)与(b1)或(b2)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性且编码果胶裂解酶的DNA分子。

上述方法中，所述抑制枸杞中果胶裂解酶基因的表达或抑制枸杞中果胶裂解酶的含量或活性均是通过CRISPR/Cas9系统实现。

上述方法中，所述CRISPR/Cas9系统包括sgRNA和Cas9蛋白；

或所述CRISPR/Cas9系统包括表达sgRNA和Cas9蛋白的质粒；

所述sgRNA的靶序列为如下(c1)或(c2)：

(c1)序列表的序列7所示的核酸分子；

(c2)与(c1)具有99％以上、95％以上、90％以上、85％以上或者80％以上同一性的核酸分子。

或所述通过CRISPR/Cas9系统实现为将所述sgRNA和所述Cas9蛋白导入目的枸杞中。