[发明专利]一种用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白，其特征在于：所述瘦素融合蛋白是由人FGF21蛋白的N端与人Leptin蛋白融合而成的，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白，其特征在于：所述瘦素融合蛋白编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

3.根据权利要求2所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白，其特征在于：所述瘦素融合蛋白编码基因由人FGF21核苷酸序列与人Leptin基因片段通过连接肽连接而成。

4.根据权利要求3所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白，其特征在于：所述连接肽为(Gly₄Ser)₃。

5.根据权利要求1所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白，其特征在于：含有瘦素融合蛋白编码基因的表达载体为pET-30a，含有瘦素融合蛋白编码基因的宿主细胞为大肠杆菌BL21。

6.一种权利要求1所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白的制备方法，其特征在于具体过程为：将人Leptin基因通过连接肽GS linker连接到人FGF21基因的N端得到编码瘦素融合蛋白的核苷酸序列，再将得到的编码瘦素融合蛋白的核苷酸序列与表达载体相连接得到重组表达载体；然后将重组表达载体导入大肠杆菌感受态细胞中；筛选稳定高效表达目标蛋白的重组菌，培养细胞并诱导表达融合蛋白，收集菌体、破碎、离心、变性、复性、纯化得到瘦素融合蛋白。

7.根据权利要求6所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白的制备方法，其特征在于：将重组表达载体转化表达菌株BL21（DE3），转化后的单菌落分别接种至20 mL含50 μg/mLKan的LB培养基中，于37℃培养10 h，以体积比1:100接种于另一20 mL含50 μg/mL Kan的LB培养基中，于37℃培养，当A₆₀₀在0.35时，在温度为30℃、IPTG终浓度为0.25 mmol/L、转速为60 r/min的条件下诱导5 h，在此条件下进行表达瘦素融合蛋白时，能够显著提高融合蛋白的表达水平。

8.根据权利要求6所述的用于治疗代谢疾病的瘦素融合蛋白的制备方法，其特征在于：将重组表达载体转化宿主细胞，筛选稳定高表达阳性克隆后培养并诱导表达目标融合蛋白，离心收集菌体，超声破碎，离心，对澄清后的上清液进行离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化目标融合蛋白，最终得到高纯度瘦素融合蛋白。