[发明专利]一种香豆素糖苷类化合物的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种香豆素糖苷类化合物小驳骨酚苷A(genglycoside A，I)、小驳骨酚苷B(genglycoside B，Ⅱ)、小驳骨酚苷D(genglycoside D，Ⅲ)的制备方法，其特征在于，所述的小驳骨酚苷A(genglycoside A，I)、小驳骨酚苷B(genglycoside B，Ⅱ)、小驳骨酚苷D(genglycoside D，Ⅲ)分子结构式分别为：

其制备方法是，以小驳骨15–20kg为原料，以2–5倍原料重量、体积浓度为75％–95％的乙醇在90–95℃下加热回流提取3次，每次提取时间为1小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.6–4.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次3.6–4.8L，时间为1.5小时；将正丁醇萃取部位经AB-8大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用体积比为0:100、30:70、95:5乙醇-水混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用3.8–5.0L洗脱液，流速为5–10mLmin^-1，将水洗脱液弃去，分别收集体积比为30:70、95:5乙醇-水的洗脱流份，减压浓缩分别得组分Fr.N1和组分Fr.N2；将组分Fr.N1经硅胶柱色谱分离，用体积比100︰3、100︰5、100︰7、100︰10、100︰20、100︰30、100︰50二氯甲烷-甲醇作洗脱液进行梯度洗脱，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，采用GF254薄层板，以体积比5︰2的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以三氯化铁-铁氰化钾试剂作为显色剂，分别收集含有目标化合物小驳骨酚苷D(Ⅲ)和小驳骨酚苷A(I)的流份，即为亚组分Fr.N1-1和亚组分Fr.N1-3；将亚组分Fr.N1-1经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，每2mL为一流份，收集含有小驳骨酚苷D(Ⅲ)的流份，用甲醇重结晶即为小驳骨酚苷D(Ⅲ)；将亚组分Fr.N1-3经高效液相色谱纯化，体积浓度为40％甲醇洗脱，收集12min的洗脱峰，即为小驳骨酚苷A(I)；将组份Fr.N2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，每10mL为一流份，收集含有化合物Ⅱ的流份，得到个亚组份Fr.N2-1，再经硅胶柱色谱纯化，用体积比100︰3、100︰5、100︰7、100︰10、100︰30的二氯甲烷-甲醇作洗脱液进行梯度洗脱，合并含有目标化合物小驳骨酚苷B(Ⅱ)的流份，减压浓缩后用甲醇重结晶即为化合物小驳骨酚苷B(Ⅱ)。

2.根据权利要求1所述的香豆素糖苷类化合物的制备方法，其特征在于，由小驳骨20kg为原料，以2–5倍原料重量、体积比浓度95％的乙醇90℃加热回流提取3次，每次提取时间为1小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于4.8L的蒸馏水中，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，每次4.8L，时间为1.5小时；将正丁醇萃取部位经AB-8大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用体积比为0:100、30:70、95:5乙醇-水混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用5.0L洗脱液，流速为10mLmin^-1，将水洗脱液弃去，分别收集体积比为30:70、95:5乙醇-水的洗脱流份，减压浓缩后，分别为组分Fr.N1和组分Fr.N2；将组分Fr.N1经硅胶柱色谱分离，用体积比100︰3、100︰5、100︰7、100︰10、100︰20、100︰30、100︰50二氯甲烷-甲醇作洗脱液进行梯度洗脱，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，采用GF254薄层板，以体积比5︰2的二氯甲烷-甲醇作为展开剂，以三氯化铁-铁氰化钾试剂作为显色剂，分别收集含有化合物小驳骨酚苷D(Ⅲ)和小驳骨酚苷A(I)的流份，即为亚组分Fr.N1-1和亚组分Fr.N1-3；将亚组分Fr.N1-1经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，每2mL为一流份，收集含有化合物小驳骨酚苷D(Ⅲ)的流份，用甲醇重结晶即为化合物小驳骨酚苷D(Ⅲ)；将亚组分Fr.N1-3经制备高效液相色谱纯化，体积浓度为40％甲醇洗脱，收集12min的洗脱峰，即为化合物小驳骨酚苷A(I)；将组份Fr.N2经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，每10mL为一流份，收集含有化合物小驳骨酚苷B(Ⅱ)的流份，得到个亚组份Fr.N2-1，再经硅胶柱色谱纯化，用体积比100︰3、100︰5、100︰7、100︰10、100︰30的二氯甲烷-甲醇作洗脱液进行梯度洗脱，合并含有化合物小驳骨酚苷B(Ⅱ)的流份，减压浓缩后用甲醇重结晶即为化合物小驳骨酚苷B(Ⅱ)。