[发明专利]一种香石蒜组织培养方法

权利要求书

1.一种香石蒜组织培养方法，包括以下步骤：

（1）将灭菌处理后的香石蒜鳞茎接种到丛生芽诱导培养基中进行诱导培养30d以上，得到第一小鳞茎；所述丛生芽诱导培养基以MS培养基为基础，添加3.0 mg/L的6-BA和0.5 mg/L的NAA，所述丛生芽诱导培养基中蔗糖的浓度为30 g/L，琼脂的浓度为7.5 g/L，pH值为5.9；所述灭菌处理包括用质量分数为4%的次氯酸钠消毒15 min；

所述接种的方法包括：

a）将灭菌处理后的香石蒜鳞茎纵向切割，得到切割后的香石蒜；所述切割后的香石蒜的宽度为0.5~1 cm，高度为1~1.5 cm；

b）将切割后的香石蒜的带鳞茎盘的一端插入到丛生芽诱导培养基中；

（2）将步骤（1）得到的第一小鳞茎接种到愈伤诱导培养基上进行诱导愈伤培养30~40d，得到愈伤团块；所述愈伤诱导培养基以MS培养基为基础，添加1.5 mg/L的2,4-D和0.2 mg/L的6-BA，所述愈伤诱导培养基中蔗糖的浓度为30 g/L，琼脂的浓度为7.5 g/L，pH值为5.9；

（3）将步骤（2）得到的愈伤团块接种到愈伤分化培养基上进行分化培养20d以上，得到第二小鳞茎；所述愈伤分化培养基以MS培养基为基础，添加2.0 mg/L的6-BA和0.5 mg/L的NAA，所述愈伤分化培养基中蔗糖的浓度为30 g/L，琼脂的浓度为7.5 g/L，pH值为5.9；

（4）将步骤（3）得到的第二小鳞茎接种到壮芽生根培养基上进行壮芽生根培养25~35d；所述壮芽生根培养基以MS培养基为基础，添加0.4 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA，所述壮芽生根培养基中蔗糖的浓度为30 g/L，琼脂的浓度为7.5 g/L，pH值为5.9。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，步骤（1）所述灭菌处理包括以下步骤：

1）去除香石蒜鳞茎的根系和外层包皮，切除鳞茎上部，保留鳞茎盘基部，剔除鳞茎盘基部外部2~3层鳞片，沿鳞茎盘中间切开，得到两个小块；

2）将步骤1）得到的两个小块用流水冲洗，在含质量分数为0.1% Tween 20的水溶液中浸泡30 min，清水冲洗2~3遍后用体积分数为75％的酒精消毒30 s，用质量分数为4%的次氯酸钠消毒15 min，用无菌水清洗4~5次，5 min/次。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，步骤1）所述鳞茎上部占所述石蒜鳞茎体积的2/3~3/4。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法的培养温度为24~26℃。

5.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法的光照时间为12~14 h/d，光照强度为1800~2500 lx。