[发明专利]提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的试剂组合产品及其方法

说明书

本发明涉及核酸提取领域，特别涉及提取人类免疫缺陷病毒HIV‑1核酸的试剂组合产品及其方法。该试剂组合产品，包括裂解液：异硫氰酸胍2‑6mol/L、螯合剂3‑20mmol/L、阴离子表面活性剂1％‑10％、非离子表面活性剂100‑300mmol/L、异丙醇1‑4mol/L和CTAB 0.1％‑5％；洗涤液：无水柠檬酸15‑45mmol/L，柠檬酸钠二水10‑40mmol/L，Proclin950 0.5‑3ml/L，pH为4.7‑5.3；洗脱液：三羟甲基氨基甲烷10‑40mmol/，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1‑15mmol/L，Proclin950 0.5‑3ml/L，Carrier RNA 0.3‑2μg/μl。各组分之间协同配合，提取的灵敏度、核酸质量和提取效率均提升，并且提取稳定性佳。

技术领域

本发明涉及核酸提取领域，具体而言，涉及提取人类免疫缺陷病毒 HIV-1核酸的试剂组合产品及其方法。

背景技术

自1981年美国首次报告艾滋病病例至今，艾滋病已造成了超过2800 万人的死亡，由于该病毒具有高致死性及传染性，且至今仍无有效疗法，已被列为世界性的主要高危防控病毒之一。

艾滋病又名获得性免疫缺陷病(Human Immunodeficiency Virus，HIV)，是一种反转录RNA病毒，艾滋病主要的致病原理是通过破坏人体的免疫机构，免疫系统的瘫痪导致各种病毒不能及时被消灭，在人体内正常繁殖产生肿瘤等临床综合征，致死性极高。艾滋病根据其基因型又分为 HIV-1型和HIV-2型两种，相对于HIV-2，HIV-1具有更强的传染性和致病性。HIV的基因结构与其它逆转录病毒基本相同，为RNA双分子，其单链RNA分子由9749个核苷酸组成，有3组共9个基因。第一组为逆转录病毒共同的基因，即gag、pol和env基因，此三个基因为病毒的结构基因，编码病毒蛋白。世界范围内被发现的HIV-2病毒主要在非州流行，大部分集中在西非地区，我国流行的艾滋病是HIV-1型毒株，由于艾滋病是反转录病毒，基因必然具有多样性，因此我国不同地域流行的 HIV-1毒株并非完全相同，具有很多亚型，国内主要是HIV-1的M组中的 AE、BC重组型以及B/B’，HIV-1由于其基因env、gag、pol区域的高突变性，具有强大的突变能力。因此为了精准的检测出艾滋病，我们在序列选择的时候一定要找到高度的保守区，并且尽可能的选择多个区段进行设计。

艾滋病的检测方法主要分为病毒培养检测，免疫金标法，抗体检测以及核酸检测等，病毒培养检测周期过长，灵敏度低；免疫金标法灵敏度低；抗体检测同样由于其需在宿主内形成一定规模的抗体达到检出限后，才能被检出，窗口期也不短，约3-5周，对于急需知道病情结果的病人来说，这段时间是很长的；而随着生物学检测技术的进展，HIV核酸检测由于其相对更短的窗口期(约1周)，快速的检测效率(约2h)，更高的灵敏度等优点，目前已在国内广泛普及及运用。

在核酸检测中，当检测对象为混合核酸时使用核酸混检的方法，如血筛需同时检测复数的病毒，需要的是兼容性；而当检测对象为单一核酸时，则使用核酸单检，需要的是针对性。现阶段市面上的HIV-1核酸提取方法还有很大的优化空间，如尚显冗余的步骤，多余的反应时间，生物危险性较高的配方及比例，粗糙的反应细节，以及较高的检出限等。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的试剂组合产品，各组分之间协同配合，提取的灵敏度、核酸质量和提取效率均提升，并且提取稳定性佳。

本发明的第二目的在于提供一种提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的方法，将裂解和结合统筹为一步，并对洗涤洗脱液进行优化，同时各步骤的操作时间严格把控，总体仅需3步即可得到目的核酸，大大提高了核酸的提取效率。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的试剂组合产品，包括：