[发明专利]提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的试剂组合产品及其方法

权利要求书

1.提取人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的试剂组合产品，其特征在于，包括：

裂解液：以水为溶剂，其组分包括：异硫氰酸胍2-6mol/L、螯合剂3-20mmol/L、阴离子表面活性剂质量浓度为1%-10%、非离子表面活性剂100-300mmol/L、异丙醇1-4mol/L和CTAB质量浓度为 0.1%-5%；

洗涤液：以水为溶剂，其组分包括：无水柠檬酸15-45mmol/L，柠檬酸钠二水10-40mmol/L，Proclin950 0.5-3.0ml/L，pH为4.7-5.3；

洗脱液：以水为溶剂，其组分包括：三羟甲基氨基甲烷10-40mmol/L，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1-15mmol/L，Proclin950 0.5-3.0ml/L，Carrier RNA 0.3-2.0µg/µl；

所述阴离子表面活性剂为十二氨基丙磺酸；

所述非离子表面活性剂为曲拉通X-100；

所述试剂组合产品还包括蛋白酶K、磁珠和矿物油；所述蛋白酶K的浓度为20±5mg/ml；所述磁珠为硅基磁珠；所述磁珠的粒径为1.2±0.2µm；

所述矿物油为石蜡油。

2.根据权利要求1所述的试剂组合产品，其特征在于，所述裂解液：以水为溶剂，其组分包括：异硫氰酸胍4.2±0.2mol/L、螯合剂10±1mmol/L、阴离子表面活性剂质量浓度为5%±0.5%、非离子表面活性剂167.6±5mmol/L、异丙醇2.6±0.2mol/L和CTAB质量浓度为 0.5%±0.05%。

3.根据权利要求1所述的试剂组合产品，其特征在于，所述洗涤液：以水为溶剂，其组分包括：无水柠檬酸30.7±2mmol/L，柠檬酸钠二水19.2±2mmol/L，Proclin950 1±0.2ml/L，pH为5±0.2。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试剂组合产品，其特征在于，洗脱液：以水为溶剂，其组分包括：三羟甲基氨基甲烷22.5±0.5mmol/L，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐7.4±0.2mmol/L，Proclin950 1±0.2ml/L，Carrier RNA 1±0.2µg/µl。

5.一种人类免疫缺陷病毒HIV-1核酸的提取方法，其特征在于，采用权利要求1所述的试剂组合产品进行提取，包括以下步骤：

蛋白酶K、内标、待测样本、裂解液、矿物油和磁珠依次加入，混合裂解，磁吸附；

加入所述洗涤液进行漂洗，经磁吸附后去除液体；

然后加入所述洗脱液，对吸附在磁珠上的核酸洗脱，得到含有目的核酸的提取液；

蛋白酶K、内标、待测样本、裂解液、矿物油、磁珠的体积比为8±0.5:1:100±1:96±1:8±0.5:2±0.2；

所述混合采用吹打混匀，吹打时间为120±10s；吹打混匀完成后进行磁吸附，所述磁吸附的时间为360±30s；洗脱时间为60±10s。

6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，内标的浓度范围为500-10000IU/ml；磁珠的浓度为50±10mg/ml。

7.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，内标的浓度范围为7000-8000IU/ml。

8.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述吹打体积为溶液总体积的80%，吹打方式为跟随液面吹打。

9.根据权利要求5-8任一项所述的提取方法，其特征在于，所述洗涤液与所述待测样本的体积比为80-150：1，吹打时间为60±10s，磁吸附时间为60±10s。

10.根据权利要求9所述的提取方法，其特征在于，所述洗涤液仅洗涤一次。

11.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述洗脱液与所述待测样本的体积比为10-15：1。