[发明专利]一测多评法评价小蓟质量的方法在审
| 申请号: | 201910272363.3 | 申请日: | 2019-04-04 |
| 公开(公告)号: | CN109991327A | 公开(公告)日: | 2019-07-09 |
| 发明(设计)人: | 张寒;郑梦迪;张彦;刘春叶;刘洁;翟西峰 | 申请(专利权)人: | 西安医学院 |
| 主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司: | 西安弘理专利事务所 61214 | 代理人: | 宁文涛 |
| 地址: | 710021 陕*** | 国省代码: | 陕西;61 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 小蓟 相对校正因子 含量测定结果 检测灵敏度 系统适用性 定位计算 临床疗效 同步测定 显著差异 药效物质 重大意义 对照品 峰定位 内参物 色谱峰 外标法 重现性 质量控制 芦丁 验证 保留 考察 保证 | ||
1.一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,具体按照以下步骤进行:
步骤1、对照品标准溶液制备
步骤1.1、分别取芦丁标准品、蒙花苷标准品以及木犀草素标准品和芹菜素标准品,用甲醇溶解后置于容量瓶、定容,即得芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液;
步骤1.2、分别取一定量的芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液混合后置于容量瓶中,用甲醇定容,得到混合对照品溶液;
步骤2、供试品溶液制备
称取小蓟药材,置于索氏提取器中,加入石油醚,水浴加热脱脂至无色后晾干,将晾干后的小蓟药材再置于索氏提取器中,加入甲醇,水浴加热提取,将提取液置于容量瓶中,加甲醇定容至刻度,得到供试品溶液,备用;
步骤3、高效液相色谱测定
取步骤1.2中制备的混合对照品溶液和步骤2中制备的供试品溶液,进行色谱条件检测分析,得到混合对照品溶液的高效液相色谱图和供试品溶液的液相色谱图;
其中,色谱条件如下:
色谱柱:Agilent HC-C18;柱温:25℃-35℃;检测波长:260nm-350nm;流动相:甲醇为流动相A,0.1%冰醋酸水为流动相B;梯度洗脱70min:
步骤4、目标化合物的含量计算
步骤4.1、利用混合对照品溶液的高效液相色谱图,计算各色谱峰的峰面积,以芦丁为内参物,根据相对校正因子计算公式分别计算蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子;
其中,Cs为内参物质量浓度,As为内参物色谱峰面积,Ck为其它成分质量浓度,Ak为其他成分色谱峰面积;
步骤4.2、对供试品溶液的高效液相色谱图中芦丁、蒙花苷、木犀草素和芹菜素相对保留时间进行峰定位,并结合步骤4.1中得到的蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子,计算供试品溶液中蒙花苷、木犀草素和芹菜素的含量。
2.根据权利要求1所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤1.1中芦丁标准溶液的浓度为0.50mg/mL、蒙花苷标准溶液的浓度为0.05mg/mL、木犀草素标准溶液的浓度为0.51mg/mL,芹菜素标准溶液的浓度为0.41mg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤1.2中的混合对照品溶液中芦丁的浓度为0.050mg/mL、蒙花苷的浓度为0.005mg/mL、木犀草素的浓度为0.051mg/mL、芹菜素的浓度为0.041mg/mL。
4.根据权利要求1所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤2中脱脂时的水浴温度为60℃。
5.根据权利要求1或4所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤2中提取时的水浴温度为50℃-90℃。
6.根据权利要求5所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤2中水浴提取的时间为1h-5h。
7.根据权利要求6所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤2中小蓟药材、石油醚和甲醇的质量比为1:5-10:8-20。
8.根据权利要求1所述的一测多评法评价小蓟质量的方法,其特征在于,所述步骤3中高效液相色谱流动相流速为0.8ml/min-1.5ml/min;进样量为10μL-20μL。
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