[发明专利]马、驴源性成分二重PCR检测试剂盒

权利要求书

1.用于马、驴源性成分鉴定的特异性引物，其包括如下引物对：

马特异性引物对：

Horse-F：5´- CAGGTGAGCCGAGCTGCGCT-3´

Horse-R：5´- TGGCGCACGCAGTTCGTCCC-3´；以及，

驴特异性引物对1：

Donkey-1-F：5´- GATTTCTGGAAAGTCGCAGAAGGG-3´

Donkey-1-R：5´- GCTTGCGAAAAGCATTGGGG-3´，和/或

驴特异性引物对2：

Donkey-2-F：5´- CATCCTACTAACTATAGCCGTG-3´

Donkey-2-R：5´-CACTAAGATGGCTGCTATTC-3´ 。

2.含有权利要求1所述特异性引物的检测试剂盒。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，其还包括下述试剂中的一种或多种： Taq酶、dNTPs、MgCl₂、PCR缓冲液、阳性对照、空白对照。

4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为马或驴基因组DNA，所述空白对照为双蒸水。

5.马、驴、骡皮张的检测方法，其步骤如下所述：

1）提取皮张基因组DNA；

2）PCR扩增：用权利要求1所述的马特异性引物对和驴特异性引物对1进行二重PCR扩增，并分别以马和驴DNA为阳性对照，以双蒸水为空白对照；

3）对PCR扩增产物进行检测和结果判定，当检测样品PCR反应产物是一条166 bp的扩增条带，判定样品是马皮；当检测样品PCR反应产物是一条102 bp的扩增条带，判定样品是驴皮；当检测样品PCR反应产物有两条扩增条带，分别是166 bp和102 bp，判定样品是骡皮；当检测样品PCR反应产物无扩增条带，判定样品中不为马、驴、骡中的任一种。

6.阿胶中马和驴源性成分鉴定的方法，其步骤如下所述：

1）提取阿胶样品DNA；

2）PCR扩增：用权利要求1所述的马特异性引物对和驴特异性引物对2进行二重PCR扩增，并分别以马和驴DNA为阳性对照，以双蒸水为空白对照；

3）对PCR扩增产物进行检测和结果判定，当检测样品PCR反应产物是一条166 bp的扩增条带，判定此样品只含有马源性成分；当检测样品PCR反应产物是一条130 bp的扩增条带，判定此样品只含有驴源性成分；当检测样品PCR反应产物有两条扩增条带，分别是166 bp和130 bp，判定此样品既含有马源性成分又含有驴源性成分；当检测样品PCR反应产物无扩增条带，判定样品中不含马和驴源性成分。