[发明专利]核桃乳DNA的提取方法

权利要求书

1.一种核桃乳DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）称取核桃乳的真空冻干样品100mg至研钵中，加液氮研磨，将研钵放56℃水浴至样品粉末刚开始融化，加入500 μL预热的CTAB裂解液3、4 μL RNase和10 μL蛋白酶 K，蛋白酶 K浓度为20 mg/mL，继续研磨30s，转移至灭菌2mL Eppordorf管中，加入300μL AxYGenAxyPrep Multisource Genomic DNA Kit试剂盒中的Buffer C-L，漩涡震荡30s；其中CTAB裂解液3中含有β-巯基乙醇和聚乙烯吡咯烷酮；其中CTAB裂解液3的成分如下：3%（w/v）CTAB；0.1mol/L Tris-HCL，pH调控为8.0；0.02mol/L EDTA；1.4mol/L NaCl；0.2%（v/v）β-巯基乙醇，2%（w/v）聚乙烯吡咯烷酮；

2）56℃孵育2h，其间每隔5-10 min将其上下颠倒震荡一次，裂解至越澄清越好；

3）加入500 μL酚、氯仿和异戊醇混合溶液，酚:氯仿:异戊醇体积比为=25:24:1，混匀，加入500 μL AxYGen AxyPrep Multisource Genomic DNA Kit试剂盒中的Buffer P-D，轻轻震荡3min，室温抽提10min，12500 r/min离心10min，离心温度15℃；

4）将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的氯仿和异戊醇混合溶液，氯仿：异戊醇体积比为24：1，充分混匀，静置5 min，12500 r/min离心8 min；

5）将上清转移至新的离心管中，加0.8倍体积的4℃冰箱预冷的异丙醇，轻轻混合均匀，-20°冰箱静置20min，12500r/min离心10分钟，弃上清，保留沉淀；

6）加入500 μL的70%乙醇，上下颠倒，充分洗涤，12500 r/min离心3 min，弃上清，加入500 μL的无水乙醇，上下颠倒，充分洗涤，12500 r/min离心3 min；

7）滤纸吸干多余水分，超净台吹干或室温晾干；

8）加入50μL预热洗脱缓冲液TE，静置15min；

9）测DNA浓度及质量；

其中，AxYGen AxyPrep Multisource Genomic DNA Kit 试剂盒的商品详情为：Costomer item#:AP-MN-MS-GDNA。