[发明专利]基于hnRNPA1剪接变体诊断慢粒急变期的试剂及试剂盒

说明书

本发明公开了hnRNPA1的8号外显子跳跃/保留剪接体(hnRNPA1‑a和hnRNPA1‑b)在制备诊断慢性粒细胞白血病急变期的试剂或含有该诊断试剂的试剂盒中的应用，本发明具有较高的灵敏度和特异性，可以更简单、准确的及早观察到慢粒急变期，以便及时采取治疗手段，具有较高的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及hnRNPA1剪接变体作为标志物在诊断慢性粒细胞白血病急变期患者中的应用，以及制备相应的检测试剂和试剂盒盒中的应用。

背景技术

慢性粒细胞性白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病，约占人白血病的20％。研究发现约95％的CML患者存在异常的细胞遗传学改变，即9号染色体和22号染色体交互易位形成费城染色体(philadelphia，Ph)和Bcr-Abl融合基因。BCR/ABL融合蛋白具有强烈酪氨酸激酶活性，异常激活下游多条信号通路，刺激造血细胞异常增殖和恶性转化。CML的病程通常分为慢性期、加速期及急变期三个阶段，慢性期相对较长且症状可控，如不经合理治疗疾病会不可避免经加速期进展到急变期，而一旦急变，预后极差。

针对CML急变的诊断，国内外出台了多套标准。这些标准的诊断指标主要有骨髓/外周血原始细胞计数、细胞克隆演化、脾肿大程度及临床药物反应性等(融合基因bcr/abl定量由于对诊断急变不敏感而未被纳入)。综合而言，这些指标均过于依赖CML细胞生物学表型和临床表现，只在急变发生之后才有一定的诊断价值，而不能在急变前期提供预警，导致临床上一再错失最佳治疗时机。因此，CML急变早期预警、靶向治疗这两个紧密相连的重要环节都亟待寻求突破。

可变剪接是指选择性地对前mRNA剪接位点的组合剪接加工，形成不同的成熟mRNA，从而使一个基因产生若干个具有独特结构和功能的蛋白质异构体的过程。近年来的研究表明，可变剪接与疾病例如癌症等的发育、分化有关，许多疾病相关基因受可变剪接调控，回顾研究发现，其中CML的特征融合基因Bcr-Abl的异常选择性可变剪接出现与CML耐药和急变的发生密切相关。Wnt通路作为转录组和蛋白质组多样性的重要驱动因素，调控基因的突变和可变剪接是导致白血病进展和治疗耐药性的重要因素。

核内不均一性核糖核蛋白A1基因(heterogeneous nuclearribonucleoproteinsA1,hnRNPA1)属于hnRNP家族，参与核酸代谢的多个过程，包括RNA转录、外显子剪接、前mRNA的成熟和降解等。已有研究报道hnRNPA1存在两种经实验验证的蛋白亚型，全长A1-b亚型为372aa，分子量为38kda，较短的320aa是34kDa为A1-a亚型，其缺失残基253～303。这两个亚型是通过选择性保留/跳跃外显子8产生的，在一些研究中也称之为hnRNPA1外显子7b。虽然前期一些研究报道证实可变剪接在CML的发生发展过程中扮演重要角色，但尚未有可变剪接，包括hnRNPA1可变剪接可能调控前mRNA异常剪接并参与慢粒急变进展的报道，因此，本领域对于慢粒急变的早期、准确和特异性的检测有迫切的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够准确早期预警慢性粒细胞白血病急变期(慢粒急变期)的诊断试剂和诊断试剂盒，以及使用所述试剂或试剂盒预警慢粒急变的方法。

本发明的一个方面在于提供了hnRNPA1剪接变体用于制备诊断慢性粒细胞白血病急变期的试剂或含有所述诊断试剂的试剂盒中的用途，所述hnRNPA1剪接变体是hnRNPA1-a亚型(核苷酸序列如SEQ ID NO.1)和/或hnRNPA1-b亚型(核苷酸序列如SEQ ID NO.2)。

所述hnRNPA1-a亚型是hnRNPA1的8号外显子选择性跳跃产生的剪接变体，所述hnRNPA1-b亚型是hnRNPA1的8号外显子选择性保留产生的剪接变体。