[发明专利]一种从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查耳酮的方法

说明书

本发明涉及一种从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查尔酮的方法，以东北岩高兰全草为原料，经过下述步骤：（1）提取；（2）高效液相色谱分离分析；（3）大孔吸附树脂富集；（4）半制备型高效液相色谱分离纯化；（5）化合物的纯度检测及结构鉴定。用半制备型高效液相色谱法进行分离纯化，流动相为甲醇‑水梯度洗脱，得到5种高纯度的成分，经核磁共振波谱鉴定分别是：2’,4’,β‑三羟基二氢查耳酮、2’‑甲氧基‑4’‑羟基二氢查耳酮、2’,4’‑二羟基二氢查耳酮、岩高兰素A及岩高兰素B。本工艺过程绿色环保，对环境无严重危害，综合成本低。

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查尔酮的方法。

背景技术

东北岩高兰Empetrum nigrum L.var.japonicum K.Koch为岩高兰科岩高兰属植物，属药用珍稀植物，在我国仅有一个变种，主要分布于东北大兴安岭地区，是国家二级药用保护植物。东北岩高兰又名黑果子，夜明豆，全株可入药，果实可滋阴保肝明目，抗坏血病；枝叶可补脾健胃、能治疗消化不良和肚腹胀满等症；全草还可作茶饮，具有助消化、提精神的养生功效。近年来，研究发现东北岩高兰可预防和治疗酒精性脂肪肝、冠心病和心肌炎等。化学研究发现东北岩高兰全草含有查耳酮类化合物，果实富含维生素、氨基酸及黄酮等。为了合理开发利用该药物资源，本发明提供了一种高效、快速、简便的从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查耳酮的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、快速、简便的从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查耳酮的方法。

本发明的方案如下：

从东北岩高兰中提取、分离纯化5种查耳酮的方法，其步骤为：

(1)查耳酮的提取：将东北岩高兰全草粉碎，用有机溶剂进行提取，过滤，提取液经减压浓缩得粗提物。

(2)查耳酮的分离分析：用分析型高效液相色谱仪对粗提物的组成进行分离分析，色谱柱为C₁₈柱(250×4.6mm I.D.,5μm)，流动相为甲醇-水梯度洗脱(甲醇：0-25分钟，67％；25-35分钟，67％-90％)，流速为1.0mL/min，检测波长为280nm，柱温为室温。

(3)查耳酮的富集：用AB-8型大孔吸附树脂对粗提物中的查耳酮进行富集，首先用20％乙醇-水溶液洗脱5个柱体积以除去杂质，再用95％乙醇-水溶液洗脱5个柱体积将查耳酮洗脱下来。

(4)查耳酮的分离纯化：用半制备型高效液相色谱仪对富集后的查耳酮进行分离纯化，色谱柱为C₁₈柱(250×25.4mm I.D.,10μm)，流动相为甲醇-水梯度洗脱(0-30分钟，65％甲醇；30-40分钟，85％甲醇)，检测波长为280nm，柱温为室温。根据色谱图手动收集目标组分馏分，减压浓缩除去溶剂。

(5)化合物的纯度检测及结构鉴定：将每一个目标组分馏分经减压浓缩后用甲醇溶解，其纯度用高效液相色谱法进行检测，色谱条件见步骤(2)，分析结果表明5种化合物的纯度都达到了95％以上。经核磁共振波谱分析5种化合物分别是：2’,4’,β-三羟基二氢查耳酮、2’-甲氧基-4’-羟基二氢查耳酮、2’,4’-二羟基二氢查耳酮、岩高兰素A及岩高兰素B。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤(1)提取溶剂为甲醇、无水乙醇、乙酸乙酯和水(优选无水乙醇)。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤(1)中提取方法为冷浸、超声和加热回流(优选加热回流)。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤(1)提取时溶剂的用量为10-25倍量(优选20倍量)。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤(1)提取时间为10-90分钟(优选30分钟)。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤(1)提取次数为1-3次(优选2次)。